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环境雌激素的存在直接威胁野生动物的生存和人类的健康,对其作用机制及筛选方法的研究,已经成为环境科学研究的热点领域。近年来,卵黄蛋白原（vitellogenin, Vtg）作为环境雌激素的“生物标志物”,在鱼类已得到广泛的应用。雄鱼和幼鱼Vtg的产生可作为一个敏感的环境雌激素暴露标志（因为正常条件下雄鱼和幼鱼体内不产生Vtg）。 斑马鱼（Danio rerio）,鲤科,原产于印度和缅甸东部。成年斑马鱼个体小,全长4～5cm,游泳活跃。起初斑马鱼主要是作为一种研究脊椎动物发育和遗传的实验动物。现在它逐渐成为经济合作与发展组织（OECD）常规试验鱼种,被广泛用于毒性测试。 本文以斑马鱼为试验动物,Vtg作为检测指标,利用酶联免疫吸附反应（ELISA）和蛋白印迹反应（Western bloaing）检测了 7β-雌二醇（E2）、壬基酚（NP）以及双酚A（BPA）对斑马鱼的雌激素效应。 Vtg存在于卵生脊椎动物血液中,对于体形较小的鱼类,获取足够血清来提纯Vtg存在着很大困难。目前国内外正在逐渐发展的一种方法是:利用卵黄脂磷蛋白（lipovitellin,Lv）代替Vtg制备多克隆抗体。Lv是卵黄蛋白的主要成分,由Vtg在卵巢中加工而成。蛋白印迹反应（Western blotting）显示,Lv抗血清与Vtg有良好的交叉反应,可以用来检测Vtg的含量。 采用Sephacryl S-300分子筛凝胶层析从雌性成熟斑马鱼鱼卵中提取Lv并制备抗Lv抗血清。本研究用Lv抗血清作为抗体,Lv作为竞争抗原建立了间接竞争酶联免疫吸附反应（ELISA）检测方法。ELISA有效工作范围为125～2000ng/ml。 雄性成体斑马鱼通过水体分别暴露于17β-雌二醇（E2）、壬基酚（NP）以及双酚A（BPA）三种化学物质中。利用ELISA及Western blowing方法对雄鱼整体匀浆液中Vtg含量分别进行定量和定性检测。ELISA结果显示:E2、NP和BPA的最低有效浓度（LOEC）分别为:10ng/L、100pg/L和2000μg/L。Westem blouing检测出三种化学物质的LOEC分别为:10ng/L、250μg/L、4000μg/L。 同时,本研究还进一步探讨了NP和BPA的联合作用。雄性成体斑马鱼暴露于不同浓度的NP和BPA混合物中,暴露完毕通过ELISA和Western blotting方法检测。将联合暴露结果与单一暴露结果进行对比,结果表明,NP和BPA联合作用时,对斑马鱼的雌激素效应远大于单一毒物雌激素效应之和,二者相互作用时表现出协同效应。