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1．携带Egr-1基因启动子调控TK基因的腺病毒载体的构建 目的 建立由放射线激活转录的早期生长反应基因-1(early growthresponse-1，Egr-1)基因启动子驱动的含单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase gene，HSV-TK简称为TK)的自杀基因的重组腺病毒载体pAdEgr-1-TK，并用绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein，GFP)做标志基因的腺病毒载体，达到通过荧光显微镜观察GFP的表达就能监测转染效率和病毒的产生。 方法 以真核表达质粒PCl-neo-Egr-1-TK(pET)为模板，设计引物扩增Egr-1，上游引物引入XbaI酶切位点，下游引物引入XhoI酶切位点，扩增产物以1.0％的琼脂糖凝胶电泳分离并鉴定，获得长度为445bp的Egr-1基因片段，目的基因克隆入穿梭载体到pAdTrack，构建重组质粒pAdTrack／Egr-1。pET经EcoRI酶切、补平，NotI酶切获得TKcDNA全长，与pAdTrack／Egr-1以EcoRV和NotI双酶切，以一端平一端粘的形式相连，构成重组质粒pAdTrack／Egr-1-TK，穿梭质粒pAdTrack插有GFP表达单位和载有腺病毒基因的一段同源序列作为与腺病毒基因组pAdEasy-1进行重组的同源臂，两者在细菌BJ5183中发生同源重组，获得重组腺病毒载体pAdEgr-1-TK，经PacI酶切线性化，按磷酸钙沉淀法转染QBI-293A细胞，等待293A细胞出现完全细胞病变后，