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目的：目前认为CD4+CD25+调节性T细胞(Treg cell)是机体免疫系统维持免疫耐受的重要调节者，可能参与乙型肝炎病毒感染慢性化的过程。转化生长因子-β1(TGF-β1)是目前已知的最重要的致纤维化因子，它的激活介导了多种组织纤维化的产生，同时其作为一种重要的免疫抑制因子在免疫调节方面发挥重要的免疫抑制的作用。本课题通过观察慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA和血清TGF-β1的表达水平，以及FOXP3和TGF-β1蛋白在活检肝组织中的表达及定位情况，分析二者与病理炎症活动度、肝纤维化分期、转氨酶、病毒载量等指标的关系，并分析FOXP3和TGF-β1之间相关性。进一步探讨CD4+CD25+调节性T细胞在CHB中的特性及作用机制，从而为CHB免疫耐受建立的主动调节机制提供有力证明，并为研究慢性乙型肝炎发病机制和治疗方法提供理论依据。 方法：⑴病例选择：入选120例病例均为慢性乙型肝炎患者，其中男86例，女34例，年龄16～69岁，平均年龄35.8±14.3岁。所有患者血清学指标均HBsAg阳性，HBeAg或抗-HBe阳性，HBV DNA阳性或阴性。诊断符合2005年中华医学会肝病学分会、感染病学分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》标准[4]。以炎症活动度分级(G)进行分组，其中G1组30例，G2组33例，G3组29例，G4组28例；设立正常对照组(G0)16例，正常肝组织来源于肝血管瘤术后。入选病例都排除甲、丙、丁、戊型病毒性肝炎重叠感染，排除药物性肝炎、自身免疫性肝病、脂肪肝、酒精性肝病等其它肝病。入选病例无肝穿活检禁忌、血小板计数均>70×109，凝血酶原活动度＞60％。⑵实验方法：于肝穿刺活检前两日，抽取患者空腹静脉血，进行乙肝五项、肝功能、HBVDNA定量、凝血酶原活动度(PTA)、TGF-β1检测。同时收集肝穿患者外周EDTA抗凝血2ml，淋巴细胞分离液分离单个核细胞，提取单个核细胞的RNA，进行逆转录cDNA，real-time PCR技术扩增检测FOXP3mRNA。所选病例均进行肝脏活体组织穿刺检查，分别进行HE、Masson、网织纤维染色，并进行炎症活动度分级(G)和纤维化分期(S)；免疫组织化学染色，检测不同炎症活动度分级及纤维化分期患者外周血单个核细胞及肝组织中FOXP3及TGF-β1的表达变化及定位特点。应用SPSS13.0软件对数据进行统计学分析。 结果：①FOXP3在不同炎症分级的表达变化：G0级，FOXP3不表达或仅见于个别散在于汇管区及肝窦内的淋巴细胞表达；G1和G2级，肝组织汇管区可见到少量至中等量FOXP3阳性表达的淋巴细胞浸润；G3和G4级，在肝组织汇管区可见到中等量至大量FOXP3阳性表达的淋巴细胞浸润。②TGF-β1在不同炎症分级的表达变化：G0期未见明显染色阳性物质，极小部分偶在肝窦间隙可见阳性物质；G1、G2期染色阳性物质主要分布于肝血窦壁及窦周细胞，炎症坏死灶及汇管区；G3、G4期在纤维间隔和肝细胞中均有分布，且着色深；G4期肝细胞、炎症坏死区内染色阳性物质尤为显著。③不同病理分级CHB外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA水平均高于正常对照组(G0)(P＜0.05)，随着炎症活动度的逐渐增加，FOXP3 mRNA表达水平逐渐增强，与炎症活动度呈正相关(r＝0.811，P＜0.05)。④不同病理分级CHB外周血单个核细胞中TGF-β1表达水平均高于正常对照组(G0)(P＜0.05)，随着炎症活动度的逐渐增加，TGF-β1表达水平逐渐增强，与炎症活动度呈正相关(r=0.769，P＜0.05)。⑤不同纤维化分期CHB外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA表达水平均高于正常对照组(S0期)(P＜0.05)，FOXP3 mRNA表达水平与纤维化程度无相关性(r=0.228，P＞0.05)。⑥不同纤维化分期CHB外周血单个核细胞中TGF-β1表达水平均高于正常对照组(S0期)(P＜0.05)，随着纤维化分期逐渐增加，TGF-β1表达水平逐渐增强，与纤维化程度呈正相关(r＝0.704，P＜0.05)。⑦不同病理分级CHB肝组织中FOXP3评分均高于正常对照组(G0组)(P＜0.05)，随着炎症活动度的逐渐增加，FOXP3评分逐渐增强，与炎症活动度呈正相关(r=0.866，P＜0.05)。⑧不同病理分级CHB肝组织中TGF-β1评分均高于正常对照组(G0组)(P＜0.05)，随着炎症活动度的逐渐增加，TGF-β1评分逐渐增强，与炎症活动度呈正相关(r＝0.841，P＜0.05)。⑨不同纤维化分期CHB肝组织中FOXP3评分均高于正常对照组(S0组)(P＜0.05)，FOXP3评分与纤维化程度无相关性(r＝0.312，P＞0.05)。⑩在肝组织中的FOXP3表达与ALT、HBV DNA定量之间无相关性。 结论：⑴CHB患者外周血单个核细胞及肝脏中Foxp3的表达随着炎症活动度的逐渐增加表达也逐渐增强，尤其以汇管区的表达更为显著，与炎症活动度之间呈正相关。肝脏炎症的存在是促进FOXP3分泌表达的必要条件。FOXP3可作为判断乙型肝炎的病情和预后的指标之一，但以肝组织中FOXP3表达更能客观反映炎症活动程度。⑵CHB患者血清及肝组织中TGF-β1表达水平随着炎症活动度和纤维化程度的逐渐增加而增强，与炎症活动度和纤维化分期呈正相关。TGF-β1在炎症的发生、发展及局部纤维化形成发挥着重要的作用。⑶CHB患者血清及肝组织中FOXP3与TGF-β1两者呈正相关，说明FOXP3与TGF-β1/Smads信号传导可能在肝组织损伤及纤维化进展过程中共同发挥了作用。⑷在肝组织中的FOXP3表达与血清中ALT、HBV DNA载量之间均无相关性。