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海洋中有着丰富的微生物资源,是获取新药和新酶等的宝贵资源,具有很好的开发前景。极端环境微生物是微生物学领域中研究的热点,而适冷菌是极端微生物中的一类。深海海底终年低温,因而是分离适冷菌和适冷酶的良好材料。适冷酶在低温下具有较高的催化效率,在需要低温催化的行业如洗涤、食品、奶制品、皮革加工、医药和化妆品中具有较高的应用价值,因而引起各国科学家的广泛研究和开发。自1999年以来,山东大学开展了对海洋适冷微生物和适冷酶的研究。陈秀兰等(2001)从1855米深的海底淤泥中分离到一株产适冷蛋白酶的适冷菌P. sp. SM9913。该菌株所产的适冷蛋白酶MCP-01具有典型的适冷特征。适冷蛋白酶MCP-01在低温下具有高的催化效率,对热很敏感,而且易自溶(Chen et al, 2002, Chen et al, 2003a； Chen et al, 2003b)。在此研究基础上,本论文首先对适冷菌P. sp. SM9913做了种属鉴定,然后对适冷蛋白酶MCP-01进行了基因克隆和结构分析,并对适冷蛋白酶MCP-01的自溶机制和糖对适冷蛋白酶MCP-01自溶的影响进行了研究。 1、产适冷蛋白酶的适冷菌SM9913的种属鉴定 根据适冷菌SM9913的形态特征和生理生化特征,曾鉴定适冷菌SM9913属于Pseudomonas属。本文根据大肠杆菌16SrDNA的保守序列设计引物,克隆了适冷菌SM9913的16SrRNA基因。利用blast软件,将适冷菌SM9913的16SrRNA基因序列与GenBank库中的16SrRNA基因序列进行同源分析,结果表明适冷菌SM9913的16SrRNA基因序列与Pseudoalteromonas属的多株菌的同源性最高(98~99%),表明适冷菌SM9913属于Pseudoalteromonas属。利用BIOLOG微生物鉴定系统分析了适冷菌SM9913对95种碳源的利用情况,结果适冷菌SM9913的碳源利用特征与Pseudoalteromonas属一致。因此,适冷菌SM9913属于Pseudoalteromonas属。根据对适冷菌SM9913的16SrRNA基因序列和Pseudoalteromonas属的菌的