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目的:了解外源hIL-12基因在转基因马铃薯中的组织表达特异性,并对该表达体系表达的hIL-12生物学活性作进一步分析,了解其抗肿瘤和抗病毒效果。
方法:采集3株转基因马铃薯的叶、茎和块茎组织进行研究,以野生马铃薯为阴性对照,用间接荧光免疫标记法、激光共聚焦显微镜以及ELISA方法观察hIL-12在转基因马铃薯不同组织的表达情况:通过MTT法观测hIL-12诱导PHA活化的外周血单个核细胞(PBMC)增殖情况,反映其生物学活性;通过MTT法检测hIL-12体外抗肿瘤作用;采用荧光定量PCR技术和ELISA检测hIL-12体外抗乙肝病毒的作用。
结果:经激光共聚焦显微镜检测,转基因马铃薯茎与块茎中均有hIL-12的表达。ELISA测定1号转基因马铃薯叶、茎和块茎表达hIL-12的量分别为194.5±13.19、163.35±23.14和458.59±1.61 pg/g;2号转基因马铃薯叶、茎和块茎hIL-12表达量分别为520.9±60.69、343.67±6.82和328.91±22.95 pg/g:3号转基因马铃薯叶、茎和块茎hIL-12表达量分别为371.19±16.22、157.22±4.42和281.19±51.48 pg/g:与野生对照组相比均有显著性差异(P<0.05)。hIL-12纯化品与阳性对照rhIL-12在体外能刺激PHA活化的PBMC增殖。hIL-12纯化品对人肝癌细胞HepG2.2.15有生长抑制作用,抑制效果随浓度的升高而增强。hIL-12纯化品能在体外对乙肝病毒DNA的复制和表面抗原、e抗原的分泌产生抑制作用。转基因马铃薯表达的hIL-12与rhIL-12对HBV的作用无显著性差异(P>0.05)。
结论:本课题组建立的人白介素-12转基因马铃薯表达体系中叶、茎和块茎均能表达hIL-12,纯化的hIL-12具有抑制肝癌细胞生长和抗乙肝病毒作用。