【摘 要】
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目的:通过探讨IL-4和基质细胞源因子(SDF)-1α/CXCL12协同刺激下,Naive Th细胞Th1型、Th2型细胞因子的表达以及信号转导通路中关键分子的活化情况,判断协同刺激诱导的Th细胞
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目的:通过探讨IL-4和基质细胞源因子(SDF)-1α/CXCL12协同刺激下,Naive Th细胞Th1型、Th2型细胞因子的表达以及信号转导通路中关键分子的活化情况,判断协同刺激诱导的Th细胞极化方向,以及其信号转导通路可能的分子机制。 方法:使用流式细胞术和RT-PCR检测IL-4和SDF-1α协同刺激的脐带血fCB)CD4~+T细胞中Th1型/Th2型细胞因子的mRNA和胞内蛋白两个水平的表达情况;利用免疫复合物激酶分析法和免疫印记法,检测协同诱导Th2极化过程中Syk激酶和ZAP-70激酶的磷酸化情况以及Cb1家族和NFAT家族活化的情况;使用ZAP-70PNA技术阻断ZAP-70的表达,探讨ZAP-70激酶在协同刺激后Th细胞极化过程中的重要意义;使用EMSA技术进一步探讨NFAT转录因子家族成员的活化情况,明确参与细胞因子转录的关键转录因子。 结果:流式检测结果:用IL-4和SDF-1α/CXCL12刺激8天,CB CD4+T细胞(Naive Th)转换成Th2细胞模式(90.3% IL-4阳性);RT-PCR检测结果:新鲜分离的CBCD4+T细胞中的IFN-γ或者IL-4 mRNA大约7.3×10~2或者2.1×10~3拷贝,相应的,用IL-4+SDF-1α/CXCL12刺激的细胞中的IL-4 mRNA大约有1.3×10~4拷贝,IFN-γ mRNA约7.8×10~1拷贝;免疫复合物激酶分析法和免疫印记检测结果:IL-4和SDF-1α/CXCL12协同刺激的8天内,ZAP-70激酶和Cbl-b蛋白发生显著而稳
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