夜蛾科昆虫包含有一些重要的农业害虫。重要虫生真菌莱氏野村菌Nomuraea rileyi（Farl.）Samson是该科昆虫较专化的病原真菌,在田间有时能在夜蛾种群中形成流行病,对于抑制虫口的大发生起着重要作用。和其它昆虫病原真菌一样,该菌也存在着致病时间较长、对环境条件要求较高等缺点,使其真菌杀虫剂的应用受到限制。利用基因工程技术提高菌株毒力,是克服这些缺点的重要途径。因此通过基因改造获得适合市场需要的真菌杀虫剂具有重要的应用价值。几丁质酶是虫生真菌侵染过程中产生的重要水解酶,可以降解昆虫体壁中含有几丁质的组分,有利于克服体壁的物理和化学屏障作用,降低昆虫对病原真菌的防御能力,以达到加快侵染过程和提高致病能力的目的。蝎毒素是神经多肽毒素,对昆虫的毒力强,且具有特异性和高度选择性,而且编码基因较小,便于分子操作,是研究蛋白质工程、神经生物学、免疫学和离子通道等的理想材料。本实验以两个分离自夜蛾科昆虫的莱氏野村菌菌株Nr03和Nr09作为出发菌株,分别引入外源基因球孢白僵菌几丁质酶基因bbchit1和北非蝎（Androctonus australis）昆虫特异性神经毒素多肽基因aait,分别构建含有不同外源基因的两个一价转基因工程菌株。实验首先构建了含有筛选标记和目的基因的质粒载体pbarGPE1-aait,再以该质粒为中间载体,扩增出含有强启动子、终止子及aait基因的GpdA-aait-TrpC基因片段,将其插入pRNA-hygro-U6.1质粒中,构建成一个含有筛选标记hygro基因和aait基因的新质粒pRNA-hygro-U6.1-aait。通过对莱氏野村菌分生孢子的抑制性实验,筛选出两种药物对莱氏野村菌的最佳抑制浓度,其中潮霉素B的最佳抑制浓度为80μg/ml,苯菌灵的最佳抑制浓度为2μg/ml。采用芽生孢子遗传转化方法对莱氏野村菌Nr03进行遗传改造,获得了一价转蝎毒基因工程菌株Nr03-A。采用同样方法,利用实验室保存的含有白僵菌几丁质酶基因的载体pbenGPS3-bbchit1对Nr09菌株进行遗传改造,获得一价转几丁质酶基因工程菌株Nr09-B。对棉铃虫幼虫的生物测定结果表明,转基因工程株的毒力显著高于野生菌株,Nr03-A比Nr03的LC₂₀降低了13.46倍,LT₂₀缩短了44.4%,Nr09-B的LC₂₀比Nr09降低了10.85倍,LT₂₀缩短了42.2%,表明超表达的bbchit1转基因和aait转基因均能显著地提高菌株的毒力。