马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是马铃薯Y病毒组的主要成员之一。马铃薯Y病毒侵染寄主的机制是与位于植物体内的一个翻译起始因子e IF4E有关,e IF4E与病毒RNA5’端的类似于帽子结构的连接蛋白VPg互作,加快了病毒RNA的翻译。在辣椒和番茄中均已得到证实,因此尝试在烟草中找到与PVY抗性相关的e IF4E家族中的对应成员。本研究首先参照豌豆、辣椒、番茄、莴苣及普通烟草中e IF4E和/或e IF(iso)4E m RNA序列,在烟草基因组数据库(红花大金元)中比对,获得11个烟草中的e IF4E序列。再通过同源性分析以及RT-PCR与测序,得到2个PVY抗性候选基因-e IF4E-6、e IF4E-10。分别设计e IF4E-6、e IF4E-10的特异性引物,从感病材料LJ925中克隆,得到大小相同的750 bp的e IF4E-6、e IF4E-10基因,构建e IF4E-6基因和e IF4E-10基因的植物表达载体,用农杆菌介导法将e IF4E-6基因和e IF4E-10基因转入抗性烟草品种VAM中,经过在预培养2-3 d、农杆菌浸染6min、共培养3 d、100 mg/L的卡那霉素进行抗性筛选、炼苗和移栽等一系列步骤,得到了e IF4E-6的抗性苗300株和e IF4E-10的抗性苗280株,从得到的转化苗中各选出120株进行PCR扩增检测,e IF4E-6转入烟草后的阳性转化率为88.3%,e IF4E-10基因转入烟草的阳性转化率为84.2%。e IF4E-6、e IF4E-10各选出60株转化株和10株对照植株,采用摩擦接种的方式对植株进行病毒接种,统计结果e IF4E-6转化苗的发病率达到81.7%,e IF4E-10转化苗的发病率仅有5%,可能原因是出现了抗性突破。结果表明,e IF4E-6与PVY抗性相关,e IF4E-10与PVY抗性不相关。