【摘 要】
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HPV-11 L1基因自然状况下存在的变异并对L1蛋白的折叠功能产生影响.所以,该实验首先通过对L1基因进行在线序列相似性检索比较,找到其保守区域,在保守区内设计两对简并引物将L
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HPV-11 L1基因自然状况下存在的变异并对L1蛋白的折叠功能产生影响.所以,该实验首先通过对L1基因进行在线序列相似性检索比较,找到其保守区域,在保守区内设计两对简并引物将L1基因分为相互重叠的两部分,并通过分析不同病毒株间限制性酶切位点的共同特征向引物5端引入限制性位点.该实验另外将该L1基因2个重叠片段插入pBV220中进行表达.由于用于pGEM-3Zf(-)克隆时的酶切点与pBV220不符,故更换酶切位点后另外设计引物,并以重组有L1基因的质粒为模板分段进行扩增.然后将2个扩增片段经双酶切后直接插入非融合表达载体pBV220,转化大肠杆菌DH5α,以温度进行诱导表达.该实验以带正电荷的尼龙薄膜为支持物利用不同长度的HBV DNA序列作为探针,进行反向斑点杂交.该实验以APES和多聚赖氨酸双重处理的玻片为支持物,将L1基因的PCR扩增产物吸附到玻片上与Biotin-dUTP标记的L1基因扩增产物进行反向杂交反应.
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