【摘 要】
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博落回为罂粟科博落回属多年生草本植物,具抗菌抗炎、抗肿瘤、促生长等药理作用。博落回的主要活性0成分为异喹啉类生物碱(Isoquinoline alkaloids),目前已从博落回植株中鉴定了200多个。据研究多种异喹啉类生物碱如四氢巴马丁、紫堇达明碱等具较强的镇痛活性,且均与其特殊的母核结构和取代基结构有关。但目前对于博落回中异喹啉类生物碱的镇痛活性则鲜有报道。基于异喹啉类生物碱的特殊母核结构,本
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博落回为罂粟科博落回属多年生草本植物,具抗菌抗炎、抗肿瘤、促生长等药理作用。博落回的主要活性0成分为异喹啉类生物碱(Isoquinoline alkaloids),目前已从博落回植株中鉴定了200多个。据研究多种异喹啉类生物碱如四氢巴马丁、紫堇达明碱等具较强的镇痛活性,且均与其特殊的母核结构和取代基结构有关。但目前对于博落回中异喹啉类生物碱的镇痛活性则鲜有报道。基于异喹啉类生物碱的特殊母核结构,本研究筛选了博落回中血根碱及白屈菜红碱的生源合成途径中的3种与具镇痛活性的异喹啉类生物碱母核一致,取代基位置不同的异喹啉类生物碱(金黄紫堇碱Cp11、碎叶紫堇碱Cp12、四氢非洲防己碱Cp19,以下均简称Cp11、Cp12、Cp19),对其进行了富集与分离纯化,并对纯化后的单体进行了小鼠镇痛活性评价,且对博落回不同生长时期不同部位中这3种生物碱的含量及动态分布进行了研究。选择阳离子交换树脂对Cp11、Cp12、Cp19的富集工艺进行了优化,筛选出了最佳工艺。最佳树脂为D001型阳离子交换树脂,上样液最佳提取方式为0.5%硫酸水1:20超声提取,上样最佳流速1 BV/h,除杂水用量为8BV,最佳洗脱条件为3%盐酸-70%乙醇0.5 BV/h洗脱,洗脱液用量为15BV。并按照最佳工艺进行放大试验对190kg博落回果期鲜叶95%乙醇粗提物中的Cp11、Cp12、Cp19进行了富集,最终得到Cp11、Cp12、Cp19的含量分别为0.23%、0.45%、0.16%的浸膏F 820 g。并通过反复硅胶柱层析法、薄层制备法及制备液相等分离手段对浸膏F中的Cp11、Cp12、Cp19进行分离纯化,得到Cp11单体27.1 mg、Cp12单体23.9 mg和Cp19单体104.2 mg。采用小鼠醋酸扭体法与小鼠热板法对分离出的Cp19进行了镇痛活性评价。试验共分为五组,小鼠以Cp19 10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg的剂量进行连续灌胃三日,最后一日灌胃结束后采用小鼠醋酸扭体法与小鼠热板法观察其行为。结果表明Cp19低中高剂量均对醋酸导致的小鼠疼痛具抑制作用,且高剂量扭体抑制率为52.91%,同时Cp19高剂量对小鼠热板痛阀有明显延长作用。Cp19高剂量对于外周和中枢疼痛均具有良好的镇痛作用。建立了HPLC同时测定博落回不同生长时期不同部位中Cp11、Cp12、Cp19含量的方法,并对博落回不同生长时期不同部位中这3种生物碱的含量进行了比较与分析。结果表明色谱图中Cp11、Cp12、Cp19分离度良好,且在各自的线性范围内线性关系良好,精密度、稳定性、重复性、加样回收率的RSD均在3%以内。Cp11在博落回花果期的果含量最高,Cp12在果期叶中含量最高,Cp19则在花期叶中含量最高。该方法操作简便、重复性高,精密度、稳定性、重复性、加样回收率等方面均符合方法学考察要求,可用于博落回中3种生物碱含量的测定。本研究确定了博落回中血根碱及白屈菜红碱生源合成通路中的中间体Cp11、Cp12、Cp19的富集工艺并对其进行了分离纯化及镇痛活性的评价,建立了HPLC同时测定博落回不同生长时期不同部位中Cp11、Cp12、Cp19含量的方法并对其动态分布进行了研究。为博落回中血根碱和白屈菜红碱生源合成途径的中间体的研究提供了新的思路,也为新型戒毒镇痛药物的开发提供数据支撑,同时也博落回产品的进一步开发与应用提供理论依据。
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