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目的:通过siRNA干扰技术降低肺腺癌细胞中自噬关键基因ATG5的表达,探究自噬抑制对肺腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响;并探究自噬抑制对吉非替尼药物疗效的作用。方法:1.运用小分子RNA干扰技术,将ATG5 siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3以及NC-siRNA转染入肺腺癌A549、HCC827及H1975细胞中,应用Real-Time–PCR和Western-Blot方法检测转染后ATG5在基因水平和蛋白水平的敲低效应,并筛选出效果最明显的一条小干扰RNA用于后续实验。运用Western-Blot方法检测自噬标志蛋白p62/SQSTM1以及LC3B的表达水平,并求得LC3BII/I的比值,验证ATG5 siRNA对三种肺腺癌细胞自噬抑制效果。2.在三种肺腺癌细胞中,ATG5 siRNA-2与NC-siRNA转染细胞48h后,用细胞划痕实验、Transwell小室迁移和侵袭实验检测自噬抑制对肺腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响。3.运用CCK8法检测三种肺腺癌细胞转染ATG5 siRNA-2与NC-siRNA后细胞增殖曲线。4.在肺腺癌细胞A549、HCC827及H1975中,siRNA转染细胞24h后,将NC组细胞与敲低组细胞铺到96孔板中,待细胞贴壁后以不同浓度的吉非替尼药物作用于细胞48小时后,用CCK8法测定各孔450nm处OD值,比较吉非替尼对ATG5 siRNA干扰组与NC siRNA组细胞抑制率。结果:1.Real-time PCR和Westren Blot检测发现,三种肺腺癌细胞中,与阴性对照组(NC-siRNA)相比,实验组中ATG5的表达在mRNA水平和蛋白水平均明显降低(P<0.05),且ATG5 siRNA-2敲低效果最好。应用ATG5siRNA转染72h后,Western-Blot结果显示与NC对照组比较,ATG5敲低组自噬标志蛋白p62表达增高、LC3BII/I比值降低(P<0.05),说明细胞自噬被有效抑制。2.细胞划痕实验结果显示,与阴性对照组相比,ATG5基因敲低组的细胞在水平方向的迁移能力明显降低(P<0.05);Transwell细胞迁移实验结果显示ATG5基因敲低组平均迁徙细胞数显著少于阴性对照组(P<0.05);Transwell细胞侵袭实验结果显示ATG5基因敲低组穿过基质胶的细胞数明显少于阴性对照组(P<0.05)。3.CCK8实验结果显示,三种肺腺癌细胞中,ATG5 siRNA-2组与阴性对照组的细胞增殖能力无统计学差异(P>0.05)。4.CCK8结果显示,在三种肺腺癌细胞中,吉非替尼作用48h后,ATG5敲低组细胞抑制率明显大于对照组(P<0.05)。结论:自噬抑制可以降低肺腺癌细胞迁移、侵袭能力,而对细胞增殖能力无明显影响。自噬抑制可以显著增强吉非替尼对肺腺癌细胞的杀肿瘤细胞作用。