目的应用巢式甲基特异性PCR法(nested methylation specific PCR,nMSP)和DNA克隆测序检测人恶性淋巴瘤CA46细胞株p16基因的甲基化状态;探讨EGCG单药及EGCG联合TSA逆转CA46细胞株p16基因甲基化状态及调节转录作用的可能机制。方法采用MTT法检测EGCG单药及EGCG联合TSA对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力的影响;采用nMSP和DNA克隆测序法检测药物作用前后p16基因甲基化状态变化;RT-PCR法检测p16、甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表达;利用流式细胞仪DNA倍体分析法探讨EGCG单药及EGCG联合TSA对人恶性淋巴瘤CA46细胞周期的影响。结果1.与对照组相比, EGCG单药及联合TSA均能明显抑制CA46细胞生长,G0/G1期细胞比例增加,以联合用药组增加尤为明显; 2.CA46细胞存在p16基因异常高甲基化,EGCG单药及联合TSA作用48h后p16基因甲基化程度明显减弱,p16基因异常甲基化的状态被逆转;3.未处理组CA46细胞p16基因在mRNA水平呈微弱表达, EGCG单药组随药物浓度增加p16基因mRNA表达逐渐增强,呈剂量依赖性,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05),联合用药组与EGCG12μg/ml组相比较,p16基因mRNA表达增高;4.与未处理组相比,EGCG单药及联合TSA作用48h后甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B的表达下降,而DNMT1表达不受影响。结论1.EGCG可能通过抑制甲基转移酶甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B活性逆转p16基因甲基化状态,实现其细胞周期调控功能,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制CA46细胞的增殖。2. TSA可能通过改变染色质结构,增强EGCG的去甲基化作用。