苏合香丸源自宋代《太平惠民和剂局方》,由苏合香、冰片、乳香、檀香、青木香、麝香等十几味香药组成,具有芳香开窍、行气温中的作用,适用于寒闭证。经历代医家临床反复验证,疗效显著。此后多版《中国药典》收载的冠心苏合丸,是在传统复方苏合香丸的基础上化裁而成。所含药物有苏合香、冰片、乳香、檀香和青木香,具有开窍行气、活血止痛之效,广泛应用于心绞痛、胸闷憋气、心肌梗塞等病症,特别对防治心绞痛的发作具有较好的疗效。心肌梗塞、心绞痛均属中医胸痹心痛范畴,究其原因主要为气滞血瘀,冠心苏合丸中大多为活血行气药,与硝酸甘油相比患者服用后不仅疗效显著,且无明显副作用,因此被广大患者所接受。但是,随着对中药肾损害认识的深入,通过在临床上对病人病史的详细询问,逐渐发现长期服用冠心苏合丸可影响肾功能,甚则导致肾损伤。冠心苏合丸组成中最有可能造成肾损伤的是青木香,因其原植物是马兜铃的根,含有马兜铃酸,长期服用可引起肾损伤,临床上把这类由马兜铃酸引起的肾损害称为马兜铃酸肾病(AAN)。由于这种原因,使得冠心苏合丸的临床应用受到了限制。丸剂为《太平惠民和剂局方》原载剂型,药味均为原粉入药,存在服药量大、吸收慢、吸收率低等缺点。而心绞痛多为急性发作,原有剂型已不能满足病情需要。故提出该课题,以中医理论为指导,应用现代制药技术,在冠心苏合丸的基础上祛除青木香并改丸剂为滴丸加工而成新冠心苏合滴丸。本实验制备的新冠心苏合滴丸是由苏合香、冰片、乳香、檀香四味药物组成。祛除青木香,避免因长期服用该药而引起的肾损伤。同时将丸剂改为滴丸剂型,可以使药物根据疼痛治疗的需要发挥速效或长效缓释的效果;通过舌下含化,被舌下粘膜血管直接吸收,迅速进入血液发挥疗效,绕过了肝脏对药物的代谢,从而进一步延长了药物作用的时间;增加药物的稳定性,减少刺激性,掩盖不良气味;应用聚乙二醇等水溶性辅料作基质,药物生物利用度高、作用快、生产方便、成本低等优点。为了探讨新冠心苏合滴丸的作用机制,本实验采用垂体后叶素致小鼠急性心肌缺血模型进行药效学研究,使其能够真正替代冠心苏合丸。1新冠心苏合滴丸制备工艺的研究目的:研究新冠心苏合滴丸处方中挥发油的提取工艺,以优选最佳提取条件;确定β–环糊精包合乳香、檀香混合挥发油的最佳工艺;探讨制剂的成型工艺,以制备新冠心苏合滴丸。方法:⑴提取工艺研究:采用正交实验,以挥发油得率为指标,筛选挥发油的最佳提取工艺。⑵包合工艺研究:采用正交实验,以包合物收得率、包合率、包合物含油率为指标,筛选混合挥发油的最佳包合工艺。⑶成型工艺研究:采用正交实验,以滴丸的圆整度、拖尾程度、粘连程度等为指标,优选出制备滴丸的最佳成型工艺。结果:⑴提取工艺研究:乳香、檀香混合挥发油的最佳提取工艺为药材粉末过10目筛、加入10倍量的水、浸泡10h、提取8h。⑵包合工艺研究:乳香、檀香混合挥发油的最优包合工艺条件是β-环糊精与挥发油按8∶1投料,加2倍量水,研磨30min。⑶成型工艺研究:以水浴温度75℃,药物:基质为1∶2,聚乙二醇4000∶聚乙二醇6000(1∶4)为基质,不包合,滴丸成型率最高。结论:优选出制备新冠心苏合滴丸的最佳提取工艺、包合工艺和成型工艺,制成了新冠心苏合滴丸。该方法简单,效率较高,适合工业化生产。2新冠心苏合滴丸的质量控制研究目的:采用薄层色谱法对新冠心苏合滴丸处方中冰片、乳香进行定性鉴别;建立反相高效液相色谱法测定制剂中肉桂酸的含量,为新冠心苏合滴丸的质量控制提供一种准确、灵敏、快速、简便的方法。方法:⑴鉴别方法的研究:采用薄层色谱法,选用合适的提取溶剂和方法,以及适宜的固定相、展开系统、显色系统等,对新冠心苏合滴丸中冰片、乳香进行鉴别。⑵肉桂酸的含量测定:①色谱条件:选择合适的固定相,调整流动相的组成、配比、流速以使肉桂酸色谱峰与其它峰完全分离。②标准曲线的绘制:配制系列浓度的肉桂酸对照品溶液,分别进样,测定峰面积,以肉桂酸浓度为横坐标,相应峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。③最低检测限的确定:逐步稀释肉桂酸对照品溶液,分别进样,当信噪比S/N≥3时确定为最低检测限。④精密度试验:取同一份新冠心苏合滴丸供试品溶液,重复进样6次,测定峰面积。⑤稳定性试验:取同一份新冠心苏合滴丸供试品溶液,在48小时内于不同时间注入液相色谱仪,分别测定峰面积。⑥重复性试验:取同一批新冠心苏合滴丸5份,制备供试品溶液,分别进样,测定肉桂酸的含量。⑦回收率试验:取已知含量的新冠心苏合滴丸适量,加入适量的肉桂酸对照品,平行制备同一浓度的样品溶液5份,分别进样。⑧样品测定:按样品溶液的制备项下方法制备所得样品溶液,在上述色谱条件下,分别测定其中肉桂酸的含量。结果:⑴鉴别方法的研究:采用相应的薄层鉴别方法,冰片、乳香薄层展开后,供试品溶液与对照药材溶液在相应位置显相同颜色的斑点,而阴性对照无干扰。⑵肉桂酸的含量测定:①色谱条件:采用安捷伦C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);以甲醇-乙腈-水-冰醋酸(10∶22∶55∶0.5)为流动相;流速为1.0ml·min-1;检测波长为272nm;柱温25℃;压力73Pa;进样量10μl。在此色谱条件下,肉桂酸保留时间约为7min,分离度大于1.5,理论塔板数大于4000,不对称因子1.02~1.12。②标准曲线的绘制:肉桂酸在0.374～3.74μg·ml-1范围内线性关系良好。回归方程为Y=366.08091X-34.63637,r=0.99956(n=6)。③最低检测限为0.236ng·ml-1。④精密度实验:样品的精密度良好,RSD值为0.22%(n=6)。⑤稳定性实验:样品在48h内稳定(n=7)。⑥重复性实验:样品的重复性好,RSD值为0.70%(n=5)。⑦回收率实验:样品平均回收率和RSD分别为100.488%,RSD为0.63%(n=5)。⑧依据上述色谱条件进行分析,计算新冠心苏合滴丸中肉桂酸的含量为0.11mg/g,RSD值为0.20%(n=5)。结论:薄层鉴别法所得斑点清晰圆整,特异性强,重复性好,可用于新冠心苏合滴丸中冰片、乳香的薄层鉴别。RP-HPLC法可准确、快速地测定新冠心苏合滴丸君药苏合香中肉桂酸的含量,此方法专属性强,精密度和准确度良好,可用于新冠心苏合滴丸中肉桂酸的含量测定。3新冠心苏合滴丸对垂体后叶素所致小鼠急性心肌缺血的实验研究目的:观察新冠心苏合滴丸对小鼠心肌缺血模型的影响并讨论其作用机制。方法:采用腹腔注射垂体后叶素(Pit)的方法复制小鼠实验性急性心肌缺血(AMI)模型,测定血清一氧化氮(NO)含量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物岐化酶(SOD)活性;取心尖部心肌组织,以生理盐水制成10%匀浆液,检测NO、MDA含量和SOD活性。结果:新冠心苏合滴丸组能明显对抗Pit引起的急性心肌缺血,提高血清和心肌组织中的NO水平、SOD活性,降低MDA含量。结论:新冠心苏合滴丸能有效防治Pit引起的心肌缺血,具有保护心肌细胞的作用。