选用健康初生犊牛，采用双灌流的方法，成功分离犊牛肝脏细胞，通过测定培养液中尿素合成能力、白蛋白分泌能力和乳酸脱氢酶的泄漏量等指标，检测细胞在分离后损伤和修复情况，寻找神经内分泌激素处理的恰当时机。以含有目的基因的质粒为模板，采用梯度稀释的方法，以SYBR greenⅠ为荧光染料，检测β-actin和SCD两个基因的扩增效率。在培养到72h时，用0、5、10、20、50IU／ml的胰岛素，0、50、100、500、1000pg/ml高血糖素，0、50、100、500、1000pg／ml神经肽Y分别处理肝细胞，以β-actin为内参基因，用荧光PCR方法检测肝细胞内硬脂酰CoA去饱和酶(SCD)mRNA的相对变化。结果表明：1．离体双灌流法可以成功的分离犊牛肝细胞，成活率均在90％以上，细胞合成尿素的能力、分泌白蛋白的能力随着培养时间先减少后增加，在培养到3～4天时乳酸脱氢酶泄漏明显减少，表明培养3～4天后肝细胞能够修复胶原酶带来的损伤，因此分离的肝细胞培养72h后，用作实验材料比较适合。2．通过质粒浓度对数与CT值，求得Y=34.14-2.95*X(Ⅰ)和Y=35.46-2.97*X(Ⅱ)，两个基因的扩展效率相同，可以用比较CT法计算SCDmRNA相对表达量。3．胰岛素能显著的促进肝细胞内SCDmRNA表达，不同浓度组间差异均显著(P＜0.05)，并呈现剂量依赖性促进效应。4．胰高血糖素显著地抑制了肝细胞SCDmRNA表达水平，不同浓度组差异极显著(P＜0.01)，并呈现剂量依赖性抑制效应。5．神经肽Y促进肝细胞内SCDmRNA表达，添加不同浓度神经肽Y组与对照组比较差异显著(P＜0.05)，除50pg／ml处理组和500pg／ml处理组之间差异不显著外，其他处理组之间差异显著(P＜0.05)。6．胰岛素和神经肽Y在体外培养的肝细胞中可通过促进SCDmRNA表达，促进肝脏脂肪沉积。而高血糖素可通过抑制SCDmRNA表达，减少肝脏脂肪沉积。