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传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的以侵害雏鸡淋巴组织,特别是中枢免疫器官一法氏囊为主要特征的传染病。该病不仅引起患病动物死亡,而且还导致机体免疫抑制,是引起我国及世界养禽业经济损失严重的主要传染病之一。近几年,由于变异株和超强毒株(wIBDV)的出现,使本病的发生和流行出现新的特点,对养鸡业的危害更加严重,并给临床诊断和治疗带来了一定困难。因此,研制快速、准确的诊断方法对IBD的防治至关重要。本研究旨在制备抗IBDV VP2蛋白的单克隆抗体,建立IBDV双抗体夹心ELISA和胶体金免疫层析试纸条检测方法,为IBD的快速检测和诊断提供帮助。本文内容包括以下三部分：实验1：分泌抗传染性法氏囊病毒VP2蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立用纯化的IBDV抗原免疫BALB/c小鼠,制备脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞系融合,获得3株能稳定分泌抗IBDV VP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为1D7,2A3和2C8,抗体亚类分别为IgG2bκ、IgG2tbκ和IgG1κ,诱生腹水的抗体效价分别为108、106和108。间接ELISA检测特异性表明,3株单克隆抗体与其他4种禽类病毒无交叉反应；间接免疫荧光试验(IFA)证明,3株单抗均与IBDV和VP2蛋白发生特异性反应；免疫印迹(western blot)分析,只有2C8能与VP2蛋白和IBDV产生特异性蛋白条带；病毒中和试验显示,单抗1D7和2C8的病毒中和效价分别为106和107,而2A3单抗没有中和活性。实验2：传染性法氏囊病毒单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立用辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体2C8作为酶标抗体,用纯化的单克隆抗体1D7作为包被抗体,建立IBDV双抗体夹心ELISA检测方法。试验结果表明：所建立的双抗体夹心ELISA检测方法与其他几种禽类病毒均无交叉反应,特异性良好；该方法检出病毒的最低限为102.5TCID50;用制备的不同批次ELISA板条进行重复检测,批间变异系数≤6.3%。本研究建立的双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于IBDV的临床诊断和检测。实验3：传染性法氏囊病毒胶体金免疫层析检测试纸条的研制本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗IBDV单克隆抗体2C8作为捕捉抗体,将纯化的抗IBDV单克隆抗体1D7和羊抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜(NC)上,分别作为检测线和质控线,优化反应条件,组装成胶体金免疫层析试纸条.结果表明：制备的试纸条不与其它几种禽类病毒产生交叉反应；其检出病毒的最低限为103TCID50;用不同批次的试纸条重复检测,结果无差异.所制备的试纸条具有良好的特异性、重复性和稳定性,与夹心ELISA的敏感性相当,比琼扩试验高约100倍,并可在1～5min内得出检测结果,便于IBDV的快速检测。