目的： 通过设计引物，利用RT-PCR的方法，对尚未报道的大鼠输卵管特殊糖蛋白核苷酸序列的进行扩增、克隆及测序。 方法： 在Genebank中查找到已知的小鼠、金仓鼠、猪和人的输卵管特殊糖蛋白的基因序列，运用Primer Premier 5.0软件对这些输卵管特殊糖蛋白的基因序列进行同源性分析。同源性分析结果发现小鼠和金仓鼠、猪、人的同源性分别为80％、54％和52％。依据同源性较大区域的基因序列设计引物，利用TRIzol Reagent提取Wistar大鼠输卵管的总RNA，用Oligo(dT)15 primer和所设计的引物进行RT-PCR，得到一条120bp DNA片段。用低熔点琼脂糖凝胶电泳回收RT-PCR所得到的产物。将回收得到的产物连接到T载体中，将重组质粒转化至JM109感受态细胞中，已转化的JM109感受态细胞在含X—Gal的LB琼脂平板培养基上培养。挑选白色菌落在LB液体培养基中进行培养扩增。用碱裂解法提取大肠杆菌中的重组质粒，并用所设计的引物通过PCR方法确认重组质粒中插入的片段。将提取的重组质粒送基因公司进行DNA测序。运用Primer Premier 5.0软件将DNA测序所得到的基因序列和已知的小鼠、金仓鼠、牛、羊及人的输卵管特殊糖蛋白的基因序列进行同源性分析。 结果： 1、用Primer Premier 5.0软件对已知的小鼠、金仓鼠、猪和人的输卵管特殊糖蛋白的基因序列进行同源性分析。利用依据同源性较大区域的基因序列设计一对引物和提取的大鼠输卵管总RNA进行RT-PCR，得到一条120bp DNA片段。 2、将得到的产物克隆至T载体中，转化、扩增重组质粒，将提取的重组质粒送基因公司测序，并将测序结果与小鼠、金仓鼠、猪和人的输卵管特殊糖蛋白核苷酸序列进行同源性分析，软件分析的结果显示目的基因与小鼠、金仓鼠、猪以及人输卵管特殊糖蛋白的核苷酸的序列的同源性分别为：90％、90％、78％、87％。同源性分析结果发现目的基因和小鼠、金仓鼠、牛、羊和人的输卵管特 殊糖蛋自的核葺酸序列有很大的同源性。结论: 本实验所获得的基因序列为目前尚未见报道的大鼠输卵管糖蛋白的基因序列的一部分。