转双价基因SFL-Bchi水稻的获得和抗病性鉴定

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近年来,几丁质酶基因和凝集素基因被广泛应用于基因工程中,几丁质酶被证实是植物体中重要的抗真菌蛋白,而凝集素具有抗真菌、细菌、抗虫的作用。本实验将构建的包含两个目的基因苦参凝集素基因(SFL)和菜豆几丁质酶基因(Bchi)和一个标记基因磷酸甘露糖异构酶基因(PMI)的双价载体pCApmi1300-SFL-Bchi通过农杆菌介导法转入水稻品种“中花11号”和“楚粳27号”中,建立其遗传转化体系。获得的转基因植株进行抗稻瘟病鉴定和抗白叶枯病鉴定实验。实验采用安全标记基因PMI筛选,提高了转基因水稻的食品安全性。主要结果如下:  1.首次将植物表达双价载体pCApmi1300-SFL-Bchi通过电激法导入到农杆菌LBA4404菌株中,首次将苦参凝集素基因和菜豆几丁质酶这两个基因同时转化到水稻中。  2.比较了转一价载体pCApmi1300-SFL、pCApmi1300-Bchi和转双价载体pCApmi1300-SFL-Bchi的水稻遗传转化体系,实验结果显示在水稻上转双价载体的转化效率低于转一价载体。  3.实验确定了最佳的甘露糖筛选浓度及分化过程中最佳的激素浓度配比。  4.将表达双价载体pCApmi1300-SFL-Bchi转入“中花11号”和“楚粳27号”中,进行PCR检测,转双价基因SFL-Bchi已经成功导入水稻中,并且得到转双价SFL-Bchi基因植株“中花11号”为1株,“楚粳27号”为2株。  5.对获得的转基因植株进行抗稻瘟病和水稻抗白叶枯病鉴定,转基因植株表现出抗病性,并且转二价基因的转基因水稻的抗病性优于转单价的转基因水稻,为培育水稻抗病新品种提供实践和材料基础。
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