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目的构建丙型肝炎病毒1b型(HCV1b)非结构蛋白4B(NS4B)的真核表达载体。研究HCV1b NS4B对HepG2细胞凋亡抑制基因Bcl-xL和XIAP表达水平的影响。方法收集HCV1b RNA阳性血清;用Trizol一步法提取HCV1b RNA;RT-PCR法扩增HCV1b NS4B基因片段,将其连接入质粒pcDNA3.1(-),构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-HCV1bNS4B。用脂质体法将重组载体pcDNA3.1(-)-HCV1bNS4B转染HepG2细胞,同时以转染空载体pcDNA3.1(-)和未转染HepG2细胞作为对照(三组细胞分别命名为: pcDNA3.1(-)-HCV1bNS4B组、pcDNA3.1(-)组及空白对照组);转染后第48 h,分别用RT-PCR法和Western blot法检测细胞内HCV1b NS4B mRNA和蛋白的表达以及各组细胞中Bcl-xL和XIAP的mRNA及蛋白相对表达水平。结果酶切鉴定及DNA测序鉴定显示真核表达载体pcDNA3.1(-)-HCV1bNS4B构建成功;RT-PCR及Western blot检测到pcDNA3.1(-)-HCV1bNS4B组细胞内有HCV1b NS4B mRNA及蛋白的表达。RT-PCR结果显示:pcDNA3.1(-)-HCV1bNS4B组、pcDNA3.1(-)组、空白对照组三组细胞的Bcl-xL mRNA相对表达量分别为1.093±0.040、0.853±0.021和0.850±0.026(F=63.337, P=0.000);XIAP mRNA相对表达量分别为1.076±0.040、0.857±0.021和0.863±0.03(5F=42.707, P=0.000)。Western blot结果显示: pcDNA3.1(-)-HCV1bNS4B组、pcDNA3.1(-)组、空白对照组三组细胞的Bcl-xL蛋白相对表达量分别为1.183±0.047、0.683±0.021和0.657±0.021(F=255.527, P=0.000);XIAP蛋白相对表达量分别为0.773±0.025、0.697±0.021和0.690±0.036(F=8.155, P=0.019)。pcDNA3.1(-)-HCV1bNS4B组Bcl-xL及XIAP mRNA表达水平比pcDNA3.1(-)组及空白对照组高,差异均有统计学意义(P值均<0.001),而pcDNA3.1(-)组与空白对照组之间Bcl-xL及XIAP mRNA表达水平差异无统计学意义(P值均>0.050);pcDNA3.1(-)-HCV1bNS4B组Bcl-xL蛋白表达水平比pcDNA3.1(-)组及空白对照组高,差异均有统计学意义(P值均<0.001),其XIAP蛋白表达水平也比pcDNA3.1(-)组及空白对照组高,差异均有统计学意义(P值均<0.050),而pcDNA3.1(-)组与空白对照组之间Bcl-xL及XIAP蛋白表达水平差异无统计学意义(P值均>0.050)。结论1.成功构建了能在HepG2细胞中表达HCV1b NS4B的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HCV1bNS4B。2. HCV1b NS4B可以上调HepG2细胞表达Bcl-xL和XIAP。