论文部分内容阅读
绵羊肺炎霉形体(MO)所致绵羊肺炎霉形体病是目前羊场中发病率和致死率最高的疾病之一。本研究通过对绵羊肺炎霉形体进行菌株纯化，对比不同培养基，含不同血清的对比培养基和含不同抗生素浓度的对比培养基对绵羊肺炎霉形体生长的影响，从而纯化了绵羊肺炎霉形体菌株Y；优化筛选出以加入10％的猪血清和正常抗生素浓度FM-4培养基培养绵羊肺炎霉形体效果最好，为进一步研究其病原学和致病机理打下基础。在改良FM-4液体培养基中接种绵羊肺炎霉形体，48h后收集菌体，经蛋白酶抑制剂处理；通过抗原提取方法的筛选，采用低渗-冻融-超声裂解法获得MO菌体蛋白作为包被抗原，初步建立了检测该病抗体的间接ELISA方法。通过试验比较，确定了ELISA的最佳反应条件为：抗原包被浓度为17.5μg/ml；以含1％BSA的PBST为最佳封闭液，37℃反应2h；血清最佳工作浓度为1:320，37℃反应1h；酶标羊抗兔IgG的最佳工作浓度为1:5000，37℃反应1h；阴阳性临界值为0.084。菌体蛋白能阻断阳性血清与相应包被抗原的反应；与丝状支原体山羊亚种阳性血清、布氏杆菌阳性血清、链球菌C群阳性血清均无交叉反应；表明特异性好。包被好的反应板4℃保存3个月，其灵敏度不变。间接ELISA能够检测出的血清最高效价为1:2560，而间接血凝试验能检测的最高效价仅为1:64。建立的间接ELISA检测绵羊肺炎霉形体抗体方法，具有操作简单、灵敏度高、特异性好、稳定可靠等优点，适用于该病的诊断与疫病普查。