论文部分内容阅读
迟钝爱德华氏菌EIB202(Edwardsiella tarda EIB202)是一种对全球海洋水产养殖业造成了巨大危害的高致病性革兰氏阴性细菌。RpoN(σ54)及RpoS(σ38)是迟钝爱德华氏菌中的重要的σ因子。本实验通过同时缺失迟钝爱德华氏菌EIB202株中这两个重要的σ因子，大规模扰动EIB202株的基因转录，进而调查rpoN及rpoS的同时缺失对其在压力耐受，毒力以及基因调控方面的影响。 本课题利用同源重组的方式成功构建出迟钝爱德华氏菌EIB202株rpoN(σ54)及rpoS(σ38)的双缺失株，即ΔrpoNΔrpoS(rnrs)，并针对此双缺失株做了相关研究。实验发现，第一，迟钝爱德华氏菌EIB202株RpoN及RpoS之间在压力耐受方面具有相互协同的调节作用。第二，迟钝爱德华氏菌EIB202株中rpoN及rpoS同时缺失以后，其毒力无论是相较于野生株还是ΔrpoN单缺失株及ΔrpoS单缺失株均显著降低。第三，通过荧光定量PCR(qRT-PCR)等试验手段还发现，稳定期时，EIB202中rpoN正调控rpoS的转录，而rpoS对rpoN无明显的调节作用。同时，rpoN正调控fliA及其他一些与鞭毛相关的基因，而rpoS的调节效应与rpoN恰好相反，表现为负调控。第四，利用差异显示PCR(DD-RT-PCR)的试验手段成功筛选出ΔrpoNΔrpoS(rnrs)中差异转录的两个基因，即cheY及narK。本实验还构建了迟钝爱德华氏菌fkpA基因的缺失株，并对其功能做了初步研究，发现其对菌体生长、毒力、热应激乙醇耐受等均无明显相关性。