【摘 要】
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目的:通过构建糖尿病ED大鼠模型,探究IGF-1、IGFBP-3双基因联合USCs移植治疗对糖尿病大鼠勃起功能障碍的疗效及其发生机制。方法:选取90只SPF级2月龄SD雄性大鼠,体重约230-280g（在2个月的饲养过程中死亡1只）。随机挑选其中的14只作为正常对照组（A组）,其余75只大鼠空腹注射链脲佐菌素（STZ）,96h后,以尾静脉采血法测得随机血糖超过16.7mmol/L的作DM大鼠。于打
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目的:通过构建糖尿病ED大鼠模型,探究IGF-1、IGFBP-3双基因联合USCs移植治疗对糖尿病大鼠勃起功能障碍的疗效及其发生机制。方法:选取90只SPF级2月龄SD雄性大鼠,体重约230-280g（在2个月的饲养过程中死亡1只）。随机挑选其中的14只作为正常对照组（A组）,其余75只大鼠空腹注射链脲佐菌素（STZ）,96h后,以尾静脉采血法测得随机血糖超过16.7mmol/L的作DM大鼠。于打STZ当天及打后2周、4周逐一测体重和血糖。并在注射后的第4周进行阿扑吗啡（APO）勃起试验,筛选掉死亡及APO试验失败的大鼠后,剩余69只大鼠随机分为5组,即糖尿病对照组（B组,13只）、注射USCs治疗组（C组,14只）、注射LV-IGF-1基因修饰的USCs治疗组（D组,14只）、注射LV-sh IGFBP-3基因修饰的USCs治疗组（E组,14只）以及联合注射LV-IGF-1及LV-sh IGFBP-3修饰的USCs组（F组,14只）。在注射不同细胞组的第2周及第4周,分别从每组随机挑选6-7只大鼠进行勃起功能检测（ICP/MAP）,检测后处死大鼠,留取其海绵体组织,对其行Western blot检测海绵体中e NOS及α-SMA的蛋白表达情况、行Masson染色检测海绵体平滑肌/胶原纤维比值,并且行免疫荧光检测组织中e NOS及α-SMA表达情况。结果:1.糖尿病大鼠造模成功率:75只实验大鼠注射STZ后的1个月饲养期间,共有3只大鼠因高血糖死亡,其余尾静脉血糖测定均超16.7mmol/L,计算得到糖尿病大鼠造模成功率为72/75*100%=96%。2.APO试验结果:造模成功并饲养1个月后,对所有存活的72只糖尿病大鼠颈部皮下注射1ml/kg的APO溶液,发现有3只大鼠有明显的龟头充血,阴茎外露,余下69只无勃起表现,计算得到APO成模率为69/72*100%=95.8%。3.勃起功能检测结果:组间对比:（1）与A组相比,B～F组大鼠在第2周及第4周分别测得的Max ICP/MAP均显著降低,差异有明显统计学意义（P＜0.01）。（2）与B组相比,C～F组大鼠在第2周及第4周分别测得的Max ICP/MAP均显著升高,差异有明显统计学意义（P＜0.01）。（3）与C组相比,D～F组大鼠在第2周及第4周分别测得的Max ICP/MAP均显著升高,差异有明显统计学意义（P＜0.01）。（4）与D组相比,E组大鼠在第2周及第4周时测得的Max ICP/MAP略低,但差异无统计学意义（P＞0.05）;而F组大鼠,在第2周时,测得的Max ICP/MAP较D显著升高（Pd＜0.01）,但治疗后4周时,统计差异不显著（P=0.177）。（5）与E组相比,F组大鼠在第2周及第4周分别测得的Max ICP/MAP均显著升高,差异有明显统计学意义（P＜0.01）。组内对比:在注射不同细胞组后,A～F组中每组大鼠所测得的Max ICP/MAP在第2周、第4周无明显差异（P＞0.05）。4.Western blot检测不同实验组海绵体中e NOS及α-SMA的蛋白表达情况:在C～F治疗组中两种标志物的表达均较B组有所升高,但不及A组（P＜0.05）。在D～F细胞注射组的表达均较C组显著升高（P＜0.05）,F组在所有细胞治疗组中表达量最高,但D、E组间差异不明显（P＞0.05）。5.Masson染色示不同组海绵体中的平滑肌/胶原纤维比值:C～F组比值远高于B组,却不及A组（P＜0.05）。D～F比值均远大于C组,其中F组最大,且差异显著（P＜0.05）,但D、E组间差异不明显（P＞0.05）。6.免疫荧光示不同组海绵体中e NOS及α-SMA表达情况:B组中两标志物表达均较A组减少（P＜0.05）,C～F组明显升高（P＜0.05）。至于C～F组间的对比,e NOS的阳性细胞比值无明显差异（P＞0.05）,而α-SMA的阳性比在F组最高,C组最低（P＜0.05）,D、E组间无明显变化（P＞0.05）。结论:1.在海绵体内注射尿源干细胞可以显著改善糖尿病大鼠的勃起功能。2.海绵体内分别注射LV-IGF-1及LV-sh IGFBP-3修饰的USCs治疗后,勃起功能较单纯注射USCs效果好,且两者联合注射时效果最佳。在个别老鼠中发现LV-IGF-1的治疗效果优于LV-sh IGFBP-3,但两者治疗效果在统计学上差异不明显。3.尿源干细胞、IGF-1及基因沉默后的IGFBP-3三者可能通过改善血管内皮功能,增加平滑肌/胶原纤维比值来促进勃起功能恢复。
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