论文部分内容阅读
本论文是由两个部分构成的,主要讨论了利用杆状病毒表达系统来构建SARS CoV类病毒颗粒(VLP)以及免疫学研究和杆状病毒做为活病毒疫苗载体的初步研究。第一部分:杆状病毒的安全性、高容量,操作简单及成本低廉等特点使它们作为表达载体和生物杀虫剂得到了不断的发展和改进。本部分主要就利用杆状病毒Bac to Bac表达系统来构建SARS CoV类病毒颗粒(VLP)和其免疫学性能的研究作了详细的阐述,以期为SARS CoV疫苗研究提供一个新的,安全而有效的方法,并为SARS CoV组装的基础研究提供技术平台。本部分由四章组成:第一章针对SARS CoV的研究状况作了综述报道,主要是对杆状病毒的基础研究和应用两个方面进行阐述,特别是对SARS CoV生物学性状的研究进展和疫苗的研究进展进行了详细的报道。第二章利用杆状病毒表达系统成功地构建了分别带有SARS CoV S,E,M结构蛋白基因的AcBacmid,根据PCR鉴定了所得的AcBacmid,通过转染昆虫细胞得到重组的AcMNPV。第三章利用带有SARS CoV结构蛋白基因的AcMNPV来共感染昆虫细胞,确定SARS CoV类病毒颗粒(VLP)在细胞内的形成,使用免疫金标来确定SARS CoV S结构蛋白组装入VLP,纯化SARS CoV类病毒颗粒。第四章对SARS CoV类病毒颗粒(VLP)免疫学特性的研究:将纯化的SARS CoV类病毒颗粒来免疫小鼠,观察小鼠的体液免疫和细胞免疫的变化,并利用假病毒系统来确定小鼠免疫血清的保护作用。结果显示类病毒颗粒可以诱导机体产生体液免疫应答和细胞免疫应答,并且其抗体具有中和作用。第二部分:杆状病毒AcMNPV能有效的转导入哺乳动物细胞内,并在哺乳动物启动子的作用下表达外源蛋白,因此其也具有在体内表达外源蛋白并引起免疫应答的可能性。本部分试验即以此为研究内容,将禽流感病毒H5N1的HA和NA基因克隆至杆状病毒内,并使其位于哺乳动物启动子下游。通过注射入小鼠体内,来检测小鼠体液免疫应答水平的变化,为证实杆状病毒做为活病毒疫苗载体的可行性,做了初步的探索。研究内容如下:第一章对禽流感病毒分子生物学特点及其疫苗的研究进展作了阐述。第二章通过PCR方法从禽流感H5N1株得到了HA,NA基因,将杆状病毒转移载体中原有的启动子用哺乳动物启动子来替换,将HA和NA基因克隆至哺乳动物启动子下游。第三章利用转座得到重组的AcMNPV,在体外通过转导哺乳动物细胞验证其有效性。注射入小鼠体内,ELISA检测免疫前后小鼠血清中抗体水平的变化。结果显示在注射前后抗体有明显的提高。表明利用杆状病毒做为活病毒疫苗载体能诱导机体产生体液免疫应答。