目的：路易斯抗原Y（Lewis antigen Y，LeY）是一种血型相关抗原，是结合于一些糖蛋白和糖脂末端的寡糖，在60-90%上皮来源的肿瘤中高表达，并与肿瘤的生长、转移等恶变程度密切相关。含LeY的糖蛋白或糖脂可分泌或脱落至血液中。本文目的是建立一种适合临床检验的血清学诊断方法，分析血清中LeY的表达情况，为临床肿瘤诊断提供依据。 方法：本实验拟建立的LeY在人血清中检测的方法如下： 一、病例选择： 选择肿瘤患者血清169例，包括乳腺癌、卵巢癌，直肠癌、肺癌、胃癌和膀胱癌，以及正常人血清200例为阴性对照。 二、ELISA双抗夹心方法的建立： 1.ELISA一般步骤 （1）小鼠抗人抗体BG-8包被；（2）3%BSA液封闭；（3）加入待检血清，并设置空白、阴性、阳性对照；（4）加入酶标荆豆凝集素UEA-1抗体；（5）加入底物显色；（6）加入终止液；（7）测定OD450nm值。 2.条件优化 （1）BG-8抗体稀释度的确定：将BG-8抗体稀释成1：2000、1：1000、1：500、1：200、1：100五个不同浓度，按ELISA步骤，对OD450nm值作图，确定最佳浓度。 （2）酶标凝集素最佳浓度测定：将酶标UEA-1配制成1μg、2.5μg、5μg、10μg、20μg，按照ELISA步骤，对OD450nm值作图，确定最佳浓度。 （3）阳性对照浓度的确定：将人子宫内膜移行上皮细胞癌细胞裂解液A431稀释成1：400、1：100、1：50、1：10、1：2五个浓度，按ELISA步骤，对OD450nm值作图，确定最佳浓度。 （4）反应时间的选择：按照ELISA步骤，改变各步反应时间，比较不同时间OD450nm值，确定适当的反应时间。 3.测定：按照已确定的条件用ELISA央心法测定不同肿瘤患者血清LeY的OD450nm值。用Westen blot法分析正常血清组及病人组LeY糖蛋白表达谱。 结果：1.条件优化：确定包被一抗和酶标凝集素二抗的工作浓度分别为：1：500、2.5μg/ml；阳性对照A431细胞蛋白裂解液工作浓度为1：50。包被条件为4℃36小时；血清反应时间为2小时；封闭时间为1小时；显色时间为20分钟。2.结果分析：（1）正常人检测标准曲线的制作：以LeY标准品稀释为1000ng/ml、500ng/ml、250ng/ml、125ng/ml、62.5ng/ml、31.25ng/ml、15.625ng/ml不同浓度作图，经回归分析做成标准曲线，回归系数r=0.966。将待测样品平均OD450nm值代入标准曲线回归方程，确定LeY含量。（2）将正常人和不同肿瘤患者之间测定值用Spss11.5进行统计学比较，分析线性关系及相关性。3.各组血清LeY测定结果为：乳腺癌：（156.81±46.93）ng/ml，卵巢癌：（176.90±50.71）ng/ml，直肠癌：（119.70±38.82）ng/ml，肺癌：（55.58±35.02）ng/ml，胃癌：（66.40±33.51）ng/ml，膀胱癌：（79.44±41.28）ng/ml，正常人：（35.17±22.49）ng/ml。实验组肿瘤血清LeY水平均明显高于正常组，差异具有统计学意义（p<0.01）；其中乳腺癌、卵巢癌组和直肠癌组与正常人组血清LeY水平差异较其他肿瘤组与正常人血清LeY水平差异更为明显。Westen blot法显示肿瘤组阳性条带检出率均高于正常组，乳腺癌、卵巢癌和直肠癌条带检出率显著高于其他癌组。 结论：1.所建立的ELISA夹心法具有灵敏、特异的特点，可用来检测血清中LeY寡糖抗原的表达。2.血清LeY水平在不同肿瘤中表达不同。在乳腺癌、卵巢癌、直肠癌、肺癌、胃癌、膀胱癌肿瘤患者例数中，以乳腺癌、卵巢癌和直肠癌表达更为明显，对乳腺癌、卵巢癌和直肠癌临床诊断有意义。3.Westen blot法进一步分析与ELISA双抗夹心法定量测定方法显著性差异趋势一致。