第一部分线粒体氧化呼吸功能对软骨细胞表型影响及相关机制的研究目的:研究线粒体氧化呼吸功能对软骨细胞表型的影响及其相关机制。方法:通过检测SD大鼠膝关节软骨细胞体外培养过程以及SD大鼠膝关节软骨退变过程中的软骨细胞表型的变化、ROS生成量的变化、PGC-1α、TFAM、UCP2和NOX1/4的表达量变化,明确膝关节软骨细胞表型的改变与线粒体氧化呼吸功能相关因子PGC-1α、TFAM、UCP2和NOX1/4的相关性;通过检测对PGC-1α、TFAM、UCP2和NOX1/4进行干预作用后软骨细胞表型以及ROS生成量的变化,明确线粒体氧化呼吸功能相关因子PGC-1α、TFAM、UCP2和NOX1/4的表达对膝关节软骨细胞表型的影响;通过检测各干预组PGC-1α、TFAM、UCP2和NOX1/4的表达变化,进一步验证PGC-1α是通过对UCP2和NOX1/4表达量的影响进而对膝关节软骨细胞表型产生调控作用,并且在UCP2和NOX1/4对膝关节软骨细胞表型的调控作用中,UCP2和NOX1/4之间存在着串扰关系。结果:膝关节软骨细胞表型丢失的过程伴随着PGC-1α、UCP2和TFAM的表达降低,NOX1/4的表达以及ROS生成量的升高;激动PGC-1α-TFAM通路后膝关节软骨细胞表型丢失现象被抑制、ROS生成量减少、UCP2表达增加,NOX1/4表达降低;抑制UCP2的表达促进了膝关节软骨细胞表型的丢失现象;抑制NOX1/4的表达能够缓解膝关节软骨细胞表型的丢失现象;抑制NOX1/4的表达后UCP2表达升高。结论:改善线粒体氧化呼吸功能是维持膝关节软骨细胞表型的重要机制;NOX1/4表达降低能够使得UCP2的表达增加,因此UCP2和NOX1/4之间存在着串扰关系。第二部分膝眼穴针灸对大鼠膝关节软骨细胞表型以及PGC-1α信号通路的影响目的:研究膝眼穴针灸疗法对膝关节软骨细胞表型以及PGC-1α信号通路的影响。方法:通过免疫组化技术检测膝眼穴针灸后大鼠膝关节软骨细胞表型的主要特征分子指标(col1、col2、aggrecan)以及PGC-1α、TFAM、UCP2和NOX1/4因子的表达变化。结果:对大鼠进行膝眼穴针灸后,PGC-1α表达增加;TFAM、UCP2和软骨细胞表型主要指标aggrecan表达下降。结论:膝眼穴针灸疗法不能改善大鼠膝关节软骨细胞的功能,相反会促进软骨细胞表型特征分子的丢失,并损害软骨细胞功能。