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植物甾醇类化合物,在心血管系统方面具有良好的生物活性。然而植物甾醇的吸收率非常低,严重影响了该类成分的活性发挥。作为植物甾醇的类似物.胆固醇却具有非常高的吸收率。因此,从植物甾醇的化学结构出发,研究不同位置的化学取代对甾醇吸收的影响,以期发现影响甾醇吸收的关键结构位点,获得优化后的高效吸收的甾醇类化合物,对研制具有良好的防治心血管病的药物具有重要意义。本论文以降血脂活性确切、富含植物甾醇的玉米花粉为原料,采用现代分离分析手段分离分析花粉中甾醇化合物,并运用高血脂小鼠模型考察了植物甾醇的降血脂活性,用大鼠肠灌流模型比较了不同甾醇类化合物的吸收情况。本文主要研究内容和结论如下:
1、建立了同时测定玉米花粉中禾本甾醇和24-亚甲基胆甾醇含量的高效液相色谱分析方法。色谱柱:XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm,Agilent),流动相:乙腈-水(90:10),检测波长:215nm,流速:1.0mL/min。禾本甾醇线性范围为1.48~8.88μg,线性关系为Y=406X+42.063,相关系数r=0.9999。24-亚甲基胆甾醇线性范围为2.16~12.96μg,线性关系为Y=468.82X+82.671,相关系数r=0.9998。方法学考察结果表明,方法准确、简便,具有良好的重复性和稳定性。用本法测得玉米花粉中禾本甾醇的含量为0.52%,24-亚甲基胆甾醇的含量为0.51%。
2、采用丙酮提取、硅胶柱层析、结晶、制备液相色谱等方法从玉米花粉中分离得到两种植物甾醇。经色谱学、光谱学方法鉴定为禾本甾醇和24-亚甲基胆甾醇,利用面积归一法进行纯度检查,两种化合物的纯度均达到98%以上。
3、研究了禾本甾醇、24-亚甲基胆甾醇、豆甾烷醇对高血脂模型小鼠的影响。结果表明,禾本甾醇、24-亚甲基胆甾醇、豆甾烷醇均能降低小鼠总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量,提高血清高密度脂蛋白(HDL-C)含量,减小动脉硬化指数,升高HDL-C/LDL-C和HDL-C/TC比值。
4、采用大鼠在体肠灌流模型,首次对胆固醇、禾本甾醇、24-亚甲基胆甾醇、豆甾烷醇的肠吸收动力学进行了研究。
(1)考察胆固醇、禾本甾醇、24-亚甲基胆甾醇、豆甾烷醇在37℃肠灌流液中的稳定性,结果表明胆固醇、禾本甾醇、24-亚甲基胆甾醇、豆甾烷醇在12h内稳定,其RSD值分别为0.64%、0.69%、0.87%、0.52%。
(2)应用大鼠原位单向肠灌流模型研究比较了胆固醇、禾本甾醇、24-亚甲基胆甾醇、豆甾烷醇在大鼠体内的肠吸收差异,从结构因素探讨导致吸收差异的原因。结果得出,胆固醇的ka,Papp显著大于禾本甾醇、24亚甲基胆甾醇和豆甾烷醇的Ka,Papp(P<0.05)。豆甾烷醇的Ka,Papp显著大于禾本甾醇、24亚甲基胆甾醇的Ka,Papp(P<0.05)。禾本甾醇和24-亚甲基胆甾醇的Ka,Papp之间无显著差异(P>0.05)。从结构方面分析,可以推断出24位亚甲基的存在直接影响了甾醇的吸收。