论文部分内容阅读
百合是世界著名的切花,在花卉市场中占有重要的地位,但是,百合与其它鲜切花一样随着花朵的开放迅速衰老,如何延长百合花朵的寿命已成为生产与消费上急需解决的实际问题,也是近20年来科学家研究的主要课题之一。由于常规杂交育种的局限性和化学保鲜剂的毒副作用。近年来,生物技术的发展,为克服传统育种的缺陷和化学保鲜剂使用的毒副作用提供了新观念、新方法和新手段。本研究是以亚洲百合‘精粹’(Lilium cv‘elite’)的无菌苗为材料,利用根癌农杆菌介导法将从百合中克隆到的ACC氧化酶基因片段采用RNA干扰(RNA interference)技术导入百合外植体,通过PCR检测获得了阳性表达植株。研究取得的主要结果为:1.鳞片离体再生体系的建立经不同培养基筛选,鳞片分化最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1。2.遗传转化受体系统的建立1)诱导叶片分化率最高的激素组合为MS+TDZ 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1,再生率达90.6%;2)诱导离体小鳞片分化率最高的激素组合为MS+6-BA 2.0 mg·L-1 +2,4-D 0.1 mg·L-1,再生率为100%;3)转化植株生根培养基为MS+NAA 0.2 mg·L-1+0.2%活性炭;4)卡那霉素筛选压力的确定:叶片作为转基因的受体材料时,卡那霉素的亚致死浓度为80 mg·L-1;小鳞片作为转基因的受体材料时,卡那霉素的亚致死浓度为115 mg·L-1。3.遗传转化用农杆菌介导法对亚洲百合转化过程中,对预培养时间、根癌农杆菌菌液浓度等转化条件进行了探索。将百合受体材料在分化培养基上预培养3 d,于根癌农杆菌菌液浓度(OD=0.8)侵染8～10 min,在含有25 mg·L-1的乙酰丁香酮的培养基上共培养3 d,转移到选择培养基中培养(其中卡那霉素浓度:叶片为80 mg·L-1,小鳞片为115 mg·L-1;抑菌所用羧苄青霉素浓度为300 mg·L-1)。此期间抗性芽长至1cm时切下转移到含抗生素的生根培养基(MS+NAA 0.2 mg·L-1+0.2%活性炭)中生根培养。4转基因植株的获得及检测研究共得到卡那霉素抗性植株200株,对其中50株进行PCR检测,现有7株扩增出目标条带,PCR检测初步证明外源基因已经整合到这7株基因组中。