猪传染性胸膜肺炎（PCP）是由胸膜肺炎放线杆菌（APP）引起的高度接触性呼吸道疾病，每年给我国的畜牧产业带来巨大的经济损失。本试验设计用APP血清3型菌S1421株为材料，用氨苄青霉素抗性基因替换其毒力蛋白的激活基因ApxⅢC，对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅢC基因缺失重组转移载体的构建进行了研究，内容如下： 1、 APP基因缺失apxⅢC-/Ampr+重组转移载体的左、右同源臂及氨苄抗性基因的克隆与鉴定。 根据NCBI发表的APP血清3型的全基因组序列，参照ApxⅢC上游和下游的部分基因，分别设计引物扩增1553 bp和1537 bp的序列作为重组转移载体的左右同源臂。将左同源臂（包含部分C基因）PCR扩增后直接TA克隆到pBS-TⅡ上；筛选获得的正向克隆命名为pBSLⅡ。将右同源臂TA克隆到pMP-19 simple载体上，命名为pMD-Ra。左、右同源臂经测序后与NCBI上公布的序列同源性均达到了99．99％。 根据pMD-19 simple载体的全基因序列，设计了一对引物扩增氨苄抗性基因，大小为861 bp。将其TA克隆到pMD-19 simple载体上，鉴定正确后命名为pMD-Amp。用HindⅢ和XbaⅠ分别双酶切卡那抗性的pVAX1质粒载体和pBSL-Amp，前者回收大片段后者回收小片段，将此二片段定向连接后转化入大肠杆菌中，复壮后涂布于含有氨苄青霉素和卡那霉素的LB/X-gal平板中，挑选白斑抽取质粒进行酶切鉴定。HindⅢ和XbaⅠ双酶切后得到一条3000 bp和近2400 bp的条带。用引物Amp（U）和Amp（L）扩增氨苄抗性基因，得到一条近900 bp的条带，与预期结果相符。证明氨苄抗性基因可用ApxⅢC基因的启动子启动表达。氨苄抗性基因经测序与宝生物公布的序列同源性达到了99．9％。 2、APP基因缺失apxⅢC-/Ampr+重组转移载体的构建。 用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切pBSLⅡ和pMD-Amp，分别胶回收大片段和小片段；连接后得到中间载体pBSL-Amp。用XbaⅠ和SacⅡ双酶切载体pBSL-Amp和pMD-Ra，分别回收大片段和小片段；连接后得到重组转移载体pBSL-Amp-R。载体经酶切和PCR鉴定正确。