目的受精率低(<30%)或者受精失败是体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET)中困扰辅助生殖技术工作者的常见问题之一。在目前我国不孕症患者求医问药完全自费的国情下,一旦发生,将会极大的加重患者的经济、心理负担。随着生殖医学的不断发展,短时受精的出现为胚胎学家及早观察卵子是否激活,及早进行补救提供了前提条件。本研究的目的是探讨授精后5h对可能受精失败的卵子行补救性卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)的可行性。方法2009年1月～12月在山东大学附属省立医院生殖医学中心接受IVF的1050名患者,精卵共培养后3h,轻柔脱去外周颗粒细胞至能清晰观察第二极体,若此时未排出第二极体则在授精后4、5h再次分别观察卵子是否排出第二极体。若截止到授精后5小时卵子已经排出第二极体,则认为卵子已经被激活,是受精的征象。如果同一名患者在授精后5h时少于65%的卵子排出第二极体,则剩余的只有第一极体的卵子接受补救性ICSI。若同一名患者在授精后5h时多于65%的卵子已经排出第二极体,则剩余的只有第一极体的卵子不再接受补救性ICSI。按照有无补救性ICSI将IVF患者分为两组：Ⅰ组：部分接受补救性ICSI,本组又按照有无补救性ICSI将卵子分为两部分,补救性ICSI部分,IVF部分；Ⅱ组：未接受补救性ICSI。201名单纯由于男性重度少、弱精子症接受ICSI治疗的患者作为对照组。所有患者均为第一次接受辅助生殖技术治疗。所有患者均签署知情同意书,本研究经过山东大学附属省立医院伦理委员同意。结果①Ⅰ组患者卵子在授精后3、4、5h第二极体排出率均低于Ⅱ组(P<0.05),Ⅰ组患者原发不孕的比例、不明原因性不孕的比例高于Ⅱ组患者(P<0.05)；②Ⅰ组、Ⅱ组、对照组,受精率、多精受精率、生化妊娠率、临床妊娠率、种植率均无显著性差异(P>0.05),Ⅰ组补救性ICSI部分卵子与IVF部分卵子的优胚率无显著性差异,但Ⅰ组补救性ICSI部分卵子优胚率低于Ⅱ组和对照组(P<0.05)。结论IVF中精卵共培养3h是可行的；授精后5h第二极体的排出可作为卵子激活的征象；授精后5h行补救性ICSI可以获得可观的临床结局,且不会增加多精受精率；低受精率可能更容易出现在原因不明性不孕及原发不孕患者。目的卵胞浆内单精子显微注射(Intracytoplasmic sperm injection, ICSI)的出现,克服了正常生理过程中精子需要克服的重重障碍,解决了大部分重度少、弱精子症患者的生育问题。然而在实际工作中遇到ICSI也不能解决的问题时,如ICSI受精率低甚至完全受精失败,胚胎学家们应该如何去处理?如何最大可能的挽救患者未受精卵子?本研究的目的是探讨A23187及嘌呤霉素在ICSI后未受精卵子补救中的应用。方法(1)2010年8月～2011年8月在山东大学附属省立医院生殖医学中心第一次接受ICSI治疗的患者,ICSI时所用精子形态基本正常,若在D1观察原核时发现受精率<30%,则剩余部分未见原核卵子在ICSI后22小时之内进行激活处理：随机分为2组：(1)5μmol/L钙离子载体A23187中37℃处理5 min,然后转移至10μg/ML嘌呤霉素37℃6%CO2中培养4小时；(2)5μmol/L钙离子载体A23187中37℃处理30min,转移至常规培养液中培养。分析激活后受精、胚胎发育情况。(2)若在D1观察原核时发现完全受精失败,则用患者丈夫的精子与科研卵子行ICSI,进行科研验证患者丈夫精子是否存在受精功能缺陷。每份精子至少与3个卵子行ICSI。所有患者均签署知情同意书,本研究经过山东大学附属省立医院伦理委员批准。结果(1)A23187联合嘌呤霉素组：共有9名患者,共32枚卵子接受激活,激活卵子22枚,2PN为7枚,2-4细胞期胚胎16枚,5-6细胞期胚胎3枚,没有胚胎继续发育到>7细胞；A23187激活30分钟组：共有7名患者,共39枚卵子接受激活,激活卵子34枚,2PN为8枚,2-4细胞期胚胎23枚,5-6细胞期胚胎2枚,>7细胞期胚胎1枚。两组激活率、2PN率、1PN率、卵裂率、2-4细胞期胚胎率、5-6细胞期胚胎率均无统计学差异(P>0.05)(2)共有8名患者接受精子验证试验,没有患者再次发生完全受精失败。结论(1)A23187联合嘌呤霉素、A23187两种方法均可以应用于ICSI后未受精卵子的补救处理,从简单、安全的角度可以优先选择A23187激活30分钟；(2)在ICSI时能挑选形态基本正常精子的患者中,ICSI受精率低或者受精失败更主要是由于卵子因素引起。目的尽管卵胞浆内单精子显微注射(Intracytoplasmic sperm injection, ICSI)可以解决大多数体外受精中遇到的低受精率或者受精失败,但实际工作中还是会遇到ICSI后受精率低甚至受精完全失败,困扰着临床医生和胚胎学家。如何将实验研究充分的应用于临床工作,更好的为患者服务?本研究的目的是探讨钙离子载体A23187在ICSI反复受精率低甚至受精失败的高受精风险患者的临床应用价值。方法(1)2010年8月～2011年8月在山东大学附属省立医院生殖医学中心接受ICSI治疗的患者中,患者病史中至少一个周期ICSI受精率<30%,这部分患者的卵子在ICSI注射后30分钟,随机分为两组：A23187组：随机选取1/2-2/3的卵子接受5μm/L A23187处理5分钟,然后转移至常规受精培养液中进行培养；对照组：未接受激活的剩余卵子。分析激活后受精率、优质胚胎率、生化妊娠率、临床妊娠率、种植率,并与对照组进行比较分析。所有患者均签署知情同意书,本研究经过山东大学附属省立医院伦理委员同意。(2)将5μmol/L设为标准浓度,分别采用1×、2×倍、4×倍标准浓度A23187及1.6%DMSO分别处理卵裂期斑马鱼受精卵(受精后0小时,Ohpf)5分钟,之后转移至标准水中培养。对照组：标准水培养斑马鱼卵。每组设4个平行组,每组鱼卵5个。分别观察处理后3、6、10、16、24、32、48、72小时各组胚胎发育、及幼鱼孵出、死亡情况。结果(1)共有11位患者,共66个卵子接受激活处理,激活的卵子数45个,2PN 39个,优质胚胎18个(46.15%),移植患者7名,放弃移植4名,共移植15枚胚胎,生化妊娠6名(85.71%),临床妊娠5名(71.43%),一名患者为双胎,种植率40.00%。剩余19枚有培养囊胚价值的胚胎进行囊胚培养,共冷冻囊胚5枚。对照组卵子共48个,受精卵子17个(35.42%),2PN 4个,其余13个均为未见到原核但有卵裂,17枚胚胎均停滞在2-4细胞期,且胚胎质量较差。对照组各项指标均显著低于A23187组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)除4×组的鱼卵在处理后3小时开始胚盘开始发生死亡外,其余各组鱼卵均全部存活且孵出,孵出的幼鱼在形态上与对照组均无显著性差异。1×、2×组斑马鱼卵的胚胎发育自3小时开始发育减缓,发育进程比对照组慢1小时左右,直至30小时时与对照组胚胎发育进程开始保持一致。DMSO组鱼卵发育、孵出均同对照组无显著性差异。结论(1)ICSI后30分钟A23187处理5分钟可应用于反复受精率低甚至受精失败等高受精风险患者,且可获得可观的临床结局。(2)A23187可能影响到斑马鱼胚胎的外包运动,但在一定的剂量下,仍然可以保证胚胎的正常发育。目的精子有多种畸形,如头部、颈部、体部畸形等。其中严重的畸形如圆头精子、巨头精子、针头精子等其受精能力会明显降低,即便采用卵胞浆内单精子显微注射(Intracytoplasmic sperm injection, ICSI),全世界范围内报道的受精率也在0-20%之间。如果发生将严重加重患者的精神、经济负担。本研究的目的是探讨A23187在全部严重畸形精子患者的临床应用价值。方法2010年8月～2011年8月在山东大学附属省立医院生殖医学中心接受ICSI治疗的患者中,丈夫既往精液常规分析显示：精子畸形率100%。取卵日丈夫所留取的精液常规分析亦显示：精子畸形率100%。行ICSI注射时,尽可能挑选形态相对正常的精子进行注射,但所用精子均为严重畸形精子。这部分患者的卵子在ICSI注射后30分钟,随机将卵子分为两组：A23187组：采用5pm/LA23187处理5分钟,然后转移至常规受精培养液中进行培养；对照组：剩余的卵子。分析激活后受精率、优质胚胎率、生化妊娠率、临床妊娠率、种植率,并与对照组进行比较分析。所有患者均签署知情同意书,本研究经过山东大学附属省立医院伦理委员批准。结果共有2名患者,一名患者全部是圆头精子,获卵4个,2个卵子接受激活处理,激活后1个卵子受精,为双原核,D2优质胚胎1枚,没有激活处理的2个卵子没有受精迹象,该患者移植胚胎1枚,获得临床妊娠；另一名患者精子全部为针头精子,获卵4个,2个卵子接受激活处理,所有卵子均未受精,放弃移植。结论ICSI后30分钟5μm/L A23187处理5分钟可应用于圆头精子患者,可以获得临床妊娠,对于其他严重的头部畸形,A23187的应用还需进一步证实。