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绒毛膜癌(choriocarcinoma CC)简称绒癌，是一种继发于正常或异常妊娠之后的滋养细胞肿瘤(gestational trophoblastic tumor,GTT)。绒癌分为妊娠性绒癌（gestational choriocarcinoma，GC）和非妊娠性绒癌（non-gestational choriocarcinoma，NGC）两种。转化生长因子β1(transforming growth factor beta1, TGF-β1)是一种多功能多肽类细胞因子，因其能够调节细胞增殖、分化和凋亡，促进细胞外基质(ECM)形成，参与胚胎发育调节等，成为目前研究最多的参与滋养细胞侵入调节的细胞因子。其I型受体（TβR-I）和Ⅱ型受体（TβRⅡ）是跨膜的丝氨酸/苏氨酸激酶，TGF-β1与TβR-I/TβRⅡ结合后，使得下游Smads蛋白磷酸化，继而启动细胞内信号转导，调节细胞核内靶基因的转录而发挥其生物学效应。其中，TGF-β1、TβR或Smads任一环节元件异常，都可以引起TGF-β/Smads信号传导紊乱。丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-actived protein kinase，MAPK）信号转导通路是细胞内的主要信息传递系统，在人类已鉴定出四条MAPK通路，其中，p38MAPK通路在细胞恶变和肿瘤浸润转移过程中发挥重要作用。参与了调节多种肿瘤细胞中侵袭相关基因的表达。有些学者研究了在皮肤光老化的治疗中以及TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的纤维化过程中Smad2/3与p38MAPK的相互作用，揭示了在多种疾病的发生机制中两条信号通路间的串话现象。c-myc基因是一种原癌基因，与细胞周期关系密切，一旦被激活，可通过对细胞的增殖作用，参与肿瘤的发生和发展。c-myc癌基因基因定位于染色体8q24，全长6-7kb，含3个外显子，编码蛋白由49个氨基酸残基组成，分子量达64/67kd。c-myc是细胞内多种信号通络下游的靶基因，c-myc蛋白作为转录因子，在调节细胞增殖、分化和凋亡方面发挥重要作用，它的过度表达可促进肿瘤细胞的生长[7]，因此，我们用MTT法观察了5ng/ml TGF-β1在不同作用时间下对绒癌JEG-3细胞的增殖的影响，寻找一个合适的不引起细胞增殖的时间点，用不同浓度的TGF受体Ⅰ、Ⅱ抑制剂（LY364947）和p38MAPK抑制剂（SB203580）作用JEG-3细胞，并通过qRT-PCR法检测JEG-3细胞中c-myc及TβRⅠ、 TβR Ⅱ mRNA的差异表达，以期进一步揭示绒癌的生物学转化机制。目的：通过qRT-PCR法检测JEG-3细胞中c-myc及TβRⅠ， TβR ⅡmRNA的表达差异，以期探讨绒癌中TGF-β1介导的Smads与p38MAPK信号转导的相互作用，从而更深一步地揭示绒癌的恶性转化、侵袭和转移的分子机制。方法：体外常规培养绒毛膜癌JEG-3细胞系，当细胞达到80%融合度后，用0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA）消化，制备成单细胞悬液。①将JEG-3细胞按初始浓度为3×104个细胞/mL接种于96孔板，37℃、5%CO2培养箱中培养达60%融合度后，将培养基改为无血清的RPMI1640培养基，继续培养12小时，以确保细胞的同步化。用5ng/mlTGF-β1作用于细胞，分别于1h、2h、6h、12h、24h终止培养。同期设立不加细胞只加培养基的空白组和只有细胞没有TGF-β1作用的对照组。除去培养基，加入20μL5mg/mlMTT与180μL RPMI-1640培养基，于37℃、5%CO2培养箱中继续培养4小时。，除去培养基并向每孔中加入150μl二甲基亚砜溶液。混匀后，在室温温度孵育10分钟后，在酶标仪490nm波长处检测各孔的OD值。每组细胞设立四个平行孔。将JEG-3细胞按初始浓度为5104个细胞/ml接种于6孔板中，37℃、5%CO2培养箱中培养达60%融合度后，分别加入1μMSB203580，3μM SB203580，1μM LY364947，3μM LY364947作用2h后，各组加入5ng/mlTGF-β1继续培养0.5h。同时设立只加细胞的对照组和不加SB203580和LY364947，只加TGF-β1的TGF-β1组。终止培养后，各组细胞提取总mRNA，用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RealTime Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, qRT-PCR）分别检测c-myc、TβRⅠ、TβRⅡmRNA的表达水平，同时，选取β-actin作为内对照。结果：(1)采用5ng/ml的TGF-β1刺激JEG-3细胞，观察其对细胞增殖和周期的影响，筛选不引起细胞增殖的TGF-β1作用时间以5ng/mlTGF-β1干预JEG-3细胞，MTT法测定不同时间JEG-3细胞的增殖情况。结果显示：TGF-β1作用1h、2h时，与对照组相比JEG-3细胞没有显著增殖（P>0.05）。这表明，在2h内，TGF-β1没有促进绒毛膜癌的增殖。TGF-β1作用6h时，JEG-3细胞显著增殖(P<0.05)。随后，随着时间的延长，当TGF-β1作用时间为12h、24h时，JEG-3细胞的增殖反而逐渐下降。因此，我们确定后续实验选用TGF-β1作用时间为2h。(2) qRT-PCR检测不同组别JEG-3细胞c-myc mRNA表达情况在TGF-β1作用下，c-myc的mRNA表达上调，比正常对照组明显升高，差异均具有显著性(P＜0.05）。给予SB203580和LY364947这两种抑制剂后，c-myc的mRNA表达均降低，与TGF-β1干预组比较明显下降，且抑制作用与浓度呈正相关。(3) qRT-PCR检测不同组别JEG-3细胞TβR Ⅰ，TβRⅡ的mRNA表达情况在TGF-β1作用下，TβR Ⅰ，TβRⅡ的mRNA表达上调，比正常对照组明显升高，差异均具有显著性(P＜0.05）。给予SB203580和LY364947这两种抑制剂后，TβR Ⅰ，TβRⅡ的mRNA表达均降低，且抑制作用与浓度呈正相关。TβRⅠ阻断TGF-β通路和p38MAPK通路可以降低TβRⅠ，TβRⅡ的表达水平，并以剂量依赖性的方式抑制。结论：(1)TGF-β1能够促进JEG-3细胞中c-myc mRNA的表达，阻断TGF-β1/Smads和p38MAPK两条通路后，能够下调c-myc的转录水平(P<0.05)。(2)阻断TGF-β通路和p38MAPK通路可以降低TβRⅠ，TβRⅡ的表达水平，并以剂量依赖性的方式抑制。