血管紧张素-(1-7)通过上调内皮型一氧化氮合酶的表达抑制循环纤维细胞的数量与功能

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目的观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对外周血循环纤维细胞(CFs)数量与功能的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法从外周血获得单个核细胞,培养14天后,获得贴壁的CFs,利用其表面双重表达CD34和Ⅰ型胶原蛋白的特点对其进行细胞免疫荧光染色鉴定。于此同时,将细胞分成四组,即:对照组,预先加入Ang-(1-7)的拮抗剂A-779组,预先加入左旋硝基精氨酸甲基酯(L-NAME)组,同时预先加入两种试剂组,给予CFs不同浓度Ang-(1-7)(10nM,100nM,1μM or10μM)分别刺激24h、48h、72h。采用苏木精-伊红染色计数、CCK-8法测定CFs的增殖能力、Annexin V/Propidium Iodide标记法测定细胞凋亡能力,消化法测定羟脯氨酸浓度间接观察细胞外胶原蛋白含量,利用western bolt来检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达,利用Griess方法来检测CFs分泌的一氧化氮(NO)含量。结果:Ang-(1-7)(?)(?)促进CFs的凋亡以及增加eNOS/NO的产生;Ang-(1-7)呈浓度及时间依赖性降低CFs的数量、增殖能力以及胶原蛋白的分泌能力。结论Ang-(1-7)可能通过上调eNOS/NO减少CFs数量并抑制CFs的功能。
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