【摘 要】
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目的: 建立山橿有效部位的富集纯化工艺和质量控制方法。 方法: 建立运用HPLC法测定球松素含量和紫外分光光度法测定山橿总黄酮含量的方法,运用统计分析软件spss17.0对
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目的: 建立山橿有效部位的富集纯化工艺和质量控制方法。 方法: 建立运用HPLC法测定球松素含量和紫外分光光度法测定山橿总黄酮含量的方法,运用统计分析软件spss17.0对测定结果进行综合评价;运用正交试验方法确立有效部位的最优提取工艺;通过考察大孔吸附树脂类型、上样条件、洗脱条件等主要指标,优选纯化工艺;选取10批纯化样品,建立山橿有效部位HPLC指纹图谱,运用“一测多评”法同时测定其中4种主要成分的含量,建立有效部位的质量控制方法。 结果: (1)球松素 HPLC 含量测定条件为:检测波长 297nm,甲醇:水梯度洗脱,回归方程为 Y=2896600X+50479(R=0.9996),线性范围 0.01μg~2.01μg,平均加样回收率为100.01%,RSD=1.35%(n=6)。(2)总黄酮含量的方法:以球松素为对照品,测定波长为286nm,回归方程为Y=0.081x+0.008(R=0.9994),在2.22μg/mL~17.80μg/mL 范围内,线性关系良好,平均加样回收率为 0.9973,RSD=2.64%(n=6)。(3)最优的提取工艺条件: 12倍量70%乙醇,浸泡30分钟,超声提取1小时,重复提取3次。结果分别按各指标与原药材比率计,总黄酮提取率4.23%,球松素提取率0.59%。纯化工艺条件为:DM130型树脂,按径高比1:8装柱, 上样浓度0.05(g/ml) [以生药材计],上样4BV(倍树脂量),流速3BV/h,上样完成后静置2h,以4BV的纯水进行除杂后,4BV的70%乙醇以3BV/h的速率进行洗脱,树脂上样3次后需再生。按照确定的工艺条件进行验证,结果使最终的纯化物中总黄酮含量达到 50.0%以上,球松素含量达到9.0%以上。(4)建立的HPLC指纹图谱标示了12个共有峰,10批样品相识度在0.96以上,通过已知化合物进行指认,确定了其中7个成分。在指纹图谱建立的色谱条件下,同时建立了一测多评法,可以在仅有球松素对照品的情况下,运用校正因子同时测定四个主要有效成分的含量。HPLC指纹图谱和一测多评法的建立,可以在一次HPLC检测中,同时运用指纹图谱和四个成分含量来进行质量控制。 结论: 本研究确定的工艺条件和质量控制方法可以为山橿的进一步药效学研究和综合开发利用奠定基础。
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