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本文在前期抗氧化核桃肽制备并证明<3kDa分子量组分具有明显改善小鼠记忆障碍的基础上,通过葡聚糖凝胶层析G-25和G-15及反向高效液相层析分离纯化,利用LC-ESI-MS/MS鉴定肽的结构,经筛选获得具有强活性氧清除活性的多肽EVSGPGLSPN（Glu-Val-Ser-Gly-Pro-Gly-Leu-Ser-Pro-Asn）和LPLLR（Leu-Pro-Leu-Leu-Arg）,并研究两种肽对H2O2诱导氧化损伤的PC12细胞保护作用机制。结果如下:1.核桃多肽（<3 kDa）经葡聚糖凝胶G-25分离得到组分A1、A2、A3、A4,经筛选组分A3活性最高,在最大浓度2 mg/mL时,PC12细胞存活率从模型组的49.78%提高到86.78%,PC12细胞内ROS含量为163.02 RFU;将A3组分进行葡聚糖凝胶G-15层析,得到组分B1、B2、B3、B4,经验证B3活性最高,在最大浓度1 mg/mL时,PC12细胞存活率从模型组的51.36%提高到81.36%,PC12细胞内ROS含量为114.31 RFU;对组分B3进行反向高效液相层析得到组分C1、C2、C3、C4、C5、C6。2.通过LC-ESI-MS/MS对组分C1-C6进行结构鉴定,结合de novo序列分析及BIOPEP数据库筛选得到10个多肽序列。细胞试验结果表明:分子质量为1148 Da的EVSGPGLSPN和分子量为610 Da的LPLLR对氧化损伤的PC12细胞具有良好的保护作用。当达到最大浓度100μM时,细胞存活率从模型组的48.95%分别提高到79.32%和73.33%;细胞内ROS含量分别从模型组的190.85 RFU和216.35 RFU下降到122.15 RFU和146.22 RFU。并且两个肽段都能显著提高细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活力（P<0.01,P<0.05）。3.通过免疫荧光染色法和蛋白印迹法研究EVSGPGLSPN对NF-κB信号通路上关键蛋白表达的影响。免疫荧光染色试验结果显示,EVSGPGLSPN能显著降低p65蛋白的表达（P<0.05）;蛋白印迹试验结果显示,EVSGPGLSPN通过显著下调IKKβ蛋白的表达（P<0.05）,抑制NF-κB信号通路激活,显著降低细胞内p65蛋白的表达（P<0.05）,进而抑制NF-κB信号通路中下游炎症因子IL-1β和TNF-α的转录;使细胞内IL-1β和TNF-α蛋白的表达显著降低（P<0.05）。4.利用蛋白印迹法分析EVSGPGLSPN对Caspase信号通路上关键蛋白表达的影响。结果表明EVSGPGLSPN通过显著下调Cyt.C,Caspase-9,Cleaved caspase-3和Cleaved PARP-1（P<0.05）使细胞凋亡减少,能够使PC12细胞抵抗ROS诱导的损伤,并显著上调CREB和突触素蛋白的表达（P<0.05）,在一定程度上恢复了PC12细胞的功能。5.利用蛋白印迹法分析LPLLR对NF-κB/iNOS/NO信号通路的影响。结果表明,模型组中H2O2能显著上调p65和iNOS蛋白表达和增加NO分泌量（P<0.01）;实验组中L PLLR能显著下调p65和iNOS蛋白表达（P<0.05）,进而降低NO分泌量（P<0.01）,说明LPLLR可能通过抑制NF-κB/iNOS/NO信号通路对H2O2诱导PC12细胞进行保护作用。