论文部分内容阅读
目的支气管肺发育不良(Bronchopulmonary dysplasia,BPD)是早产儿,特别是极低出生体重早产儿严重并发症之一,而高氧是导致早产儿BPD最重要和最常见因素之一。Notch1/Hes1信号和CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein α,C/EBPα)在肺发育及肺损伤中均发挥重要作用。本研究利用Notch1通路激活剂和抑制剂分别刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞(Type Ⅱ alveolar epithelial cell,AECⅡ),在常氧及高氧下探讨Notch1/Hes1信号是否可调控C/EBPα表达并影响AECⅡ细胞增殖与分化。方法体外培养人AECⅡ,将细胞随机分为对照组、激活剂组和抑制剂组。对照组加入等体积PBS缓冲液,激活剂组加入Notch通路激活剂Jagged1蛋白500 ng/ml,抑制剂组加入Notch通路抑制剂DAPT 10 μmol/L。建立高氧暴露细胞损伤模型,将细胞随机分为空气组、空气+Notch激活剂组、高氧组和高氧+Notch激活剂组。空气组加等体积PBS缓冲液,空气+Notch激活剂组加入Notch通路激活剂Jagged1蛋白500 ng/ml,高氧组按 3 L/min 通入 950 ml/L O2和50 ml/L CO2高纯混合气体且持续10分钟,加等体积PBS缓冲液,高氧+Notch激活剂组在通氧前30分钟加入Notch通路激活剂Jagged1蛋白500 ng/ml。建模成功后均置于37℃、50 ml/L CO2培养箱中,于造模成功后24小时收获各组细胞。采用RT-qPCR和Western blot法分别检测Notch1、Hes1及C/EBPα的mRNA与蛋白表达水平;CCK-8法及活细胞计数法检测细胞增殖;流式细胞术标记肺泡Ⅰ型上皮细胞(Type Ⅰ alveolar epithelial cell,AEC Ⅰ)特异性表面标志蛋白水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)检测AECⅡ分化。结果(1)与对照组比,激活剂组Notch1、Hesl、C/EBPα mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.05),CCK-8值及活细胞计数升高,AQP5阳性细胞比降低,增殖增加而分化减少(P<0.05);抑制剂组Notch1、Hes1、C/EBPα mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),CCK-8值及活细胞计数降低,AQP5阳性细胞比升高,增殖减少而分化增加(P<0.05)。(2)与空气组比,空气激活剂组Notch1、Hes1、C/EBPα mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.05),CCK-8值及活细胞计数升高,AQP5阳性细胞比降低,AEC Ⅱ增殖增加而分化减少(P<0.05);高氧组和高氧激活剂组Notch1、Hes1、C/EBPαmRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),CCK-8值及活细胞计数降低,AQP5阳性细胞比升高,AECⅡ细胞增殖减少而分化增加(P<0.05);与高氧组比,高氧激活剂组Notch1、Hes1、(C/EBPα mRNA和蛋白表达增加(P<0.05),CCK-8值及活细胞计数升高,AQP5阳性细胞比降低,AECⅡ增殖增加而分化减少(P<0.05)。结论Notch1/Hes1信号可调控C/EBPα表达并能影响AECⅡ增殖与分化,高氧下激活Notch1/Hes1信号可上调C/EBPα表达并调节AECⅡ增殖与分化。