第一部分:抗L3T4单抗对线粒体ADP/ATP载体合成肽诱导的心肌病免疫干预研究 目的:探讨抗L3T4单克隆抗体对自身免疫性心肌病的免疫治疗作用。 方法:以线粒体ADP/ATP载体肽免疫小鼠建立自身免疫性心肌病模型(免疫应答组，n=12)；免疫耐受组小鼠(n=6)在被予肽免疫的第-1、0和1天，同时接受尾静脉注射抗L3T4单抗；免疫治疗组小鼠(n=6)在被予肽免疫的第3个月接受抗L3T4单抗的治疗；以不含肽的相同免疫液免疫小鼠作为对照组(n=12)。采用ELISA法检测小鼠血清抗线粒体ADP/ATP载体抗体动态变化及细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α的表达，观察小鼠心肌组织在光镜和电镜下的病理改变，计算左心室肌中的胶原纤维容积分数。 结果:免疫治疗组与免疫应答组小鼠抗ADP/ATP载体抗体检测均为阳性，但前者抗体水平有短暂性下降；免疫耐受组和对照组均为阴性。与心脏表现正常的对照组相比，在免疫的第30天，免疫应答组细胞因子表达均增高(P均＜0.01)，且以IFN-γ和IL-2为明显，心脏出现类心肌炎样改变；在第180天以IL-4、IL-6和TNF-α增高明显，心脏出现类扩张型心肌病样变。免疫治疗组变化与免疫应答组相似，但第180天的细胞因子增高水平较之偏低(P均＜0.01)、心脏损伤较之略轻；免疫耐受组与对照组相比均无显著性差异。 结论:抗L3T4单抗能抑制抗线粒体ADP/ATP载体抗体的产生与细胞因子的表达，对线粒体ADP/ATP载体肽诱导的小鼠自身免疫性心肌病有治疗作用，且早期疗效更为明显，能诱导免疫耐受。 第二部分:抗L3T4单抗对自身免疫性心肌病小鼠的T细胞受体信号通路的影响 目的:通过研究T细胞信号分子的表达，探讨抗L3T4单抗抑制自身免疫性心肌病发生的分子机制。 方法:以线粒体ADP/ATP载体肽免疫小鼠以建立自身免疫性心肌病动物模型(免疫应答组，n=12)；在予相同肽免疫的前期和后期分别加予抗L3T4单抗进行干预，建立免疫耐受组(n=6)和免疫治疗组(n=6)小鼠模型；以不含肽的相同免疫液免疫小鼠作为对照(n=12)。应用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠T细胞内P56lck、P59fyn、Zap-70及细胞因子的表达，三色流式细胞术检测其Th亚群的分布，免疫细胞化学法观察其T细胞表面CD45的表达，比色法检测其T细胞内钙调神经磷酸酶(CaN)的活性。 结果:在免疫的第30天和第180天，对照组小鼠各检测指标均无明显变化；与对照组相比，在第30天，免疫应答组小鼠T细胞内P56lck、P59fyn、Zap-70及细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-6和IL-4的基因表达、Th1/Th2亚群的百分含量、CD45的表达强度和CaN活性均明显增高(P均＜0.01)，且以IFN-γ和IL-2的基因表达及Th1亚群含量增高更为显著；在第180天，P561ck、P59fyn、Zap-70及IL-6和IL-4的基因表达、Th2亚群含量、CD45的表达强度和CaN活性增高更为明显；而此时免疫治疗组也有类似改变，但其各项检测指标水平均低于免疫应答组(P均＜0.01)；免疫耐受组与对照组相比，P56lck偏高，但其明显低于免疫应答组和免疫治疗组(P均＜0.01)，余较对照组均无显著性差异。 结论:抗L3T4单抗通过调控T细胞受体信号转导通路抑制线粒体ADP/ATP载体肽诱导自身免疫性心肌病的发生和发展。 第三部分:抗L3T4单抗诱导小鼠对线粒体ADP/ATP载体肽免疫耐受的“感染性”研究 目的:验证抗L3T4单抗诱导小鼠对线粒体ADP/ATP载体肽的免疫耐受是否具有“感染性”。 方法:将第一部分实验中的第180天的各组小鼠杀死，取其新鲜脾细胞分别过继转输给另外3组同源近交系Balb/c小鼠：(1)DCM过继组(n=6)：接受免疫应答组小鼠脾细胞；(2)耐受过继组(n=6)：接受免疫耐受组脾细胞；(3)过继对照组(n=6)：接受正常对照组的脾细胞，并在过继后予与第一部分实验相同的线粒体ADP/ATP肽免疫耐受过继组。采用ELISA法检测各组小鼠的血清抗ADP/ATP载体自身抗体，以实时荧光定量PCR检测小鼠T细胞内细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-4基因表达，以3色流式细胞术检测Th1/Th2亚群的分布，并用光镜与电镜进行心脏形态学和心肌病理组织学观察。 结果:DCM过继组小鼠血清抗ADP/ATP自身抗体检测均为阳性，耐受过继组与过继对照组均为阴性。在过继后的第180天，与正常的过继对照组相比，DCM过继组小鼠T细胞内细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-4mRNA表达水平均明显增高，且以IL-4更为显著(P均＜0.01)；Th1/Th2细胞亚群百分含量均增多，且以Th2亚群更为明显(P均＜0.01)；心脏出现类扩张型心肌病样改变。耐受过继组细胞因子水平和Th细胞亚群分布较对照组均无显著性差异，心脏形态及心肌组织病理学检查均无明显异常改变。各组小鼠检测指标分别与相应的过继前免疫应答组、免疫耐受组和对照组相比，均无显著性差异。 结论:抗L3T4单抗能抑制线粒体ADP/ATP载体肽诱导小鼠产生自身免疫性扩张型心肌病，且此免疫耐受能“感染”给同源受体小鼠。Th1/Th2细胞亚群的平衡在此耐受中起重要作用。