细菌Ⅵ型分泌系统（Type VI secretion system,T6SS）普遍存在于革兰氏阴性菌中,在革兰氏阴性菌整个基因组中占比达到1/4左右,并且具有较高的保守性。Ⅵ型分泌系统通过分泌一些效应蛋白等物质在细菌种间、种内竞争、群集效应、压力应答等方面发挥重要的生理生化功能。截止目前,T6SS系统的主要结构组分及其各组分所发挥的功能是人们研究较为深入的部分,但在T6SS基因簇上,依旧存在有大量功能未知的、可编码T6SS效应物的基因,ypk＿2589则是其中之一。前期本课题组从假结核耶尔森氏菌（Yersinia pseudotuberculosis,YPⅢ）中鉴定出本效应蛋白基因,并研究了该基因编码蛋白在菌中的部分生理学功能。为进一步探究其分子生物学意义,本研究以YPK＿2589为主要研究对象,在原有实验数据的基础上重点对其功能及作用机制进行深入研究。本研究中,通过在大肠杆菌Escherichia coli,BL21（DE3）中表达ypk＿2589基因,初步明确该基因的表达对于大肠杆菌BL21（DE3）菌株的生长具有延缓作用。为进一步揭示ypk＿2589毒性作用机制,结合蛋白结构预测及其他生物信息学手段对其结构及功能进行了初步分析判断;通过大肠杆菌异源表达YPK＿2589重组蛋白,纯化得到高活力的重组蛋白;通过RNA水解实验,初步判定YPK＿2589蛋白是一个非特异性水解RNA的RNase,结合温度、PH及金属离子浓度等条件对RNase活性的影响状况,通过设置不同的反应梯度,探索了上述不同条件对YPK＿2589蛋白水解活性的影响,初步判定了YPK＿2589蛋白作为RNase的基础生化性质。随后,在研究中,通过构建ypk＿2589基因截短突变体及保守氨基酸位点点突变,在大肠杆菌BL21（DE3）中验证了YPK＿2589发挥RNase活性的关键结构域,同时对于其水解RNA的关键活性位点进行了初步的探索。本项研究证实了YPK＿2589蛋白是一种新型RNA酶,在细胞质中发挥功能,通过非特异性水解RNA抑制宿主细胞或竞争菌的生长;此研究揭示该效应蛋白的作用机制,为研究假结核耶尔森氏菌生长和致病机制提供一定助力。