苜蓿中华根瘤菌042B和费氏中华根瘤菌RT19与耐盐有关基因的克隆和表达

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhouf
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
将苜蓿中华根瘤菌O42B与耐盐有关的4kbDNA片段用HindIII酶切,得到2.4kb和1.6kb的DNA片段.先回收并纯化2.4bkDNA片段,与pBBR1-MCS2连接,并转化大肠杆菌DH5α,得到转化子GS2.以GS2为供体,GZ17为受体,在辅助质粒pRK2013的协助下,进行三亲本杂交,在含有0.4MNaCl的FY平板上得到接合子GG2.通过Southern杂交,在GG2中检测到了2.4kbDNA片段的存在.另一段1.6kbDNA残留在pML122上,让其自连,并转化大肠杆菌S17-1,得到转化子GSO.以GSO为供体,GZ17为受体,进行二亲本杂交.在含0.4MNaCl的平板上没有得到接合子.将与耐盐有关的2.4kbDNA片段连接到测序载体pGEM-7Zf(+)上进行测序,得到该片段的全序列.采用DNAman软件对该序列进行分析,确定了3个阅读框架ORF1、ORF2和ORF3.采用BLAST软件进行同源性比较,发现ORF1为不完整的阅读框.费氏中华根瘤菌RT19与耐盐有关的1.8kbDNA片段含有一个开放阅读框,经亚克隆及功能检测,证实该阅读框与耐盐有关,定名为rstB基因.采用BLAST软件,进行同源性比较,发现该蛋白与苜蓿中华根瘤菌的酸性胞外多糖合成有关的酶有36﹪的同源性.然后将其连接到表达载体pTHioHisA、B和C,得到重组质粒pGA、pGB和pGC.经IPTG诱导发现pGC编码的融合蛋白TrxA-RstB在大肠杆菌中获得了表达,并通过Western印迹证实.
其他文献
地理国情监测项目是一项基于地理国情普查工作基础上的数据更新工作,本文主要介绍了地理国情监测项目的总体技术流程,结合本职工作,总结了在工作中所遇到的问题、注意事项以
随着风电并网容量的增加,风电系统概率短路分析(probabilistic short-circuit analysis,PSCA)中,需要解决诸如多重故障、风电功率不确定性、提高PSCA计算效率以及建立PSCA灵
国民经济和社会发展第十二个五年规划纲要:依托信息、控制和储能等先进技术,推进智能电网建设,切实加强城乡电网建设与改造,增强电网优化配电能力和供电可靠性。建成330千伏及以上输电线路20万公里。开展智能电网建设试点,改造建设智能变电站,推广应用智能电表,配套建设电动汽车充电设施。智能电网作为未来电网的发展方向,渗透到发电、输电、变电、配电、用电各个环节。在上述这些环节中,智能变电站无疑是最核心的一环
在钢铁工业的进步和发展过程中,钢铁产品用户对质量的要求日益提高,为了追求产品档次的提升和更高的产品满意度,热轧带钢企业也将产品质量作为追求的重点.对热轧带钢而言,卷
该论文对黑刺菝葜根茎中化学成分进行了系统预试,对黄酮、皂甙、多糖、油脂、矿元素、氨基酸类等多种化学成分进行了含量测定,对皂类化学成分进行了提取分离,并对皂甙类化合
本工程拟采用满堂脚手架,在纵、横方向,由不少于三排立杆并与水平杆、水平剪刀撑、竖向剪刀撑、扣件等构成的脚手架.该架体顶部作业层施工荷载通过水平杆传递给立杆,顶部立杆
期刊
该论文依据1、Confocal对蚕豆叶片下表皮气孔开放过程及其保卫细胞液泡pH的动态变化跟踪测定,发现在保卫细胞渗透调节开始前20-30秒,液泡pH发生-0.5个单位的变化,而与气孔开
本人通过近几年从事市政工程项目经营投标活动中的工作经历,对投标文件商务标书的组织编制工作进行总结,提出编制注意事项和相应的技术措施,从而提高投标过程中编制人员的工
对甲醇营养型毕赤酵母表达系统的研究和应用有近20年的历史。大量文献资料表明,许多外源基因可以在毕赤酵母中成功表达,但表达水平有时相差很大。基因表达的影响因素较多。迄
阿月浑子为世界重要干果,具有很高的经济价值.,中国新疆有少量栽培,但由于研究的缺乏(国内文献不足5篇),严重限制了中国承月浑子生产.该文对阿月浑子种子萌发特性、生长特性