大鼠辅助性肝移植实验研究

来源 :中国人民解放军第四军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaoyueeryubing
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辅助性肝移植作为肝移植的一个重要类型,经过近40年的不断研究发展,在治疗先天性肝脏疾病和急性肝功能衰竭等方面获得了一些经验。但辅助性肝移植临床效果不甚满意,诸如在远期效果,如何建立正确的门静脉血流预防门静脉高压的形成,尤其是移植肝与自体肝脏的功能竞争、移植肝脏的萎缩等问题还有待进一步探讨,实验研究也仅停留在动物模型的建立和肝脏组织学观察等方面。本研究通过建立两种不同门静脉血供的大鼠异位辅助性肝移植模型,观察辅助性肝移植效果以及影响移植效果的因素。在细胞及分子水平上研究了当门静脉血供发生变化时,自体肝脏和移植肝脏在形态、功能,凋亡与增殖等方面的改变,为临床辅助性肝移植提供理论依据。本一致,围手术期处理及手术方法提高了大鼠辅助性肝移植成功率,两种辅助性肝移植均可作为研究辅助性肝移植的良好动物模型。 第二部分 血供变化对自体肝及移植肝功能的影响 将大鼠随机分为四组:对照组:仅翻动肝脏各叶;肝功能衰竭组:切除肝脏的肝左叶、中间叶、右上叶(约占全肝的70%),制成急性肝功能衰竭模型;常规组:急性肝功能衰竭十辅助性肝移植组;动脉化组:急性肝功能衰竭十辅助性肝移植十门静脉动脉化组。各组在手术后1,3,7,15,30,45天取材,对自体肝和移植肝行血清学,组织学观察,超微结构等观察。结果提示:1存活率:对照组48h存活率为100%;肝功能衰竭组术后48h存活率趴 常规组和动脉化组大鼠48小时存活率分别为76.7%,83.3%;2.转氨酶变化:术后常规组,动脉化组ALT,AST,GGT,ALP,TBIL值均显著降低,与急性肝功能衰竭组相比,具显著性差异 (P<0.05* 提示术后早期,自体肝十移植肝可维持机体代谢需要;3.组织学观察:移植术后15天,常规组和动脉化组自体肝细胞均明显增生,而移植肝开始萎缩,肝细胞变性,汇管区有淋巴细胞浸润,至移植后期,两组移植肝仅存纤维网状结构;4.超微结构观察:常规组和动脉化组在移植前期无明显差异,自体肝线粒体,糖原增多,移植肝毛细胆管增粗,胶原纤维增生。5.核素扫描结果提示,在手术后15天,自体肝和移植肝功能均正常,术后30天,动脉化组移植肝的功能较常规组差,存在显著性差异(/0.05)。 第三部分 血供变化对自体肝及移植肝细胞凋亡的影响 实验分组同第二部分,应用原位杂交、梯状电泳、TUNEL末端标记、RT-PCR等技术检狈两肝中 TRAIL及其受体 DRS 以及 ST肌3等有关凋亡和增殖基因的表达。结果提示:术后15天,常规组,动脉化组在TRAIL及 5其受体无显著性差异,至移植术后30天,动脉化组移植肝TRAIL及其受体表达均较常规组为高(p<0.05),凋亡指数即 TUNEL标记率提示同样结果,说明动脉化组细胞凋亡增加。结论:①建立门静脉动脉化辅助性肝移植和常规辅助性肝移植模型,操作简 单,耗时短,模型稳定,但门静脉动脉化辅助性肝移植难以单人完 成;②门静脉动脉化辅助性肝移植和常规辅助性肝移植,均能有效的防治 急性肝功能衰竭;③移植肝无论维持门静脉血供与否,在移植后期,均难以避免萎缩;④门静脉动脉化效果不如常规的辅助性肝移植,细胞凋亡程度和移植 肝萎缩程度都大于常规的辅助性肝移植;⑤常规组因自体肝无肠系膜上静脉回肝血流,自体肝功能恢复和增生 明显降低。
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