小鹅瘟(Goose plague，GP)是由鹅细小病毒(Goose parvovirus，GPV)所引起的主要侵害4～20日龄雏鹅的急性或亚急性败血性传染病，死亡率高达90～100％，是危害养鹅业最严重传染病之一。VP3是GPV衣壳表面的主要结构蛋白，可诱导机体产生中和抗体，是GPV主要宿主保护性抗原。本研究旨在研究GPV重组亚单位疫苗及其免疫原性。 参照GenBank中收录的GPV B株(登录号U25749)VP1基因序列，设计一对特异引物。采用PCR方法从GPV ZJ-04株基因组扩增出VP1基因并克隆到pMD18-T载体中。序列测定结果表明，GPV ZJ-04株VP1基因大小为2199bp，编码732个氨基酸。GPV ZJ-04株与其他参考毒株的VP1基因核苷酸序列同源性为95.3％～99.2％，氨基酸同源性为97.7％～99.3％，提示VP1基因序列高度保守。VP1基因系统进化树分析表明，ZJ-04株属于GPV分支，与台湾分离株亲缘关系较近，MDPV与GPV分属不同的进化枝。VP1蛋白抗原性指数与其他参考毒株无显著差异。 根据ZJ-04株VP1基因序列测定结果，设计带有Sail和BamHI酶切位点的特异引物，用PCR方法扩增VP3基因片段，并将其亚克隆到pET-32a表达载体，获得表达重组质粒pET-VP3。用pET-VP3转化Ecoli BL-21(DE3)感受态细胞，获得重组菌BL-VP3。SDS-PAGE、Western-blot检测结果表明重组VP3分子量约80KD，能与GPV抗体发生特异性反应，大小与预期结果相同，且主要以包涵体形式存在。 扩大培养重组菌BL-VP3，超声波破碎细菌，提取重组VP3包涵体。将VP3包涵体和重组菌BL-VP3为抗原，分别制备GPV油乳剂亚单位疫苗。18只1月龄白鹅分为3组：1、2组为试验组，分别用重组VP3包涵体(1mg/只)和BL-VP3重组菌(1010CFU/只)免疫，3组为对照组。疫苗经皮下注射免疫，间隔两周后加强免疫一次。免疫后14d采血，分离血清，用琼脂扩散试验检测免疫鹅血清抗体效价。结果表明，重组VP3和重组菌具有良好的抗原性和免疫原性，试验鹅免疫2周后均能产生特异性抗体，其中包涵体免疫组抗体效价达到1:16，重组菌免疫组达到1:32。上述结果为进一步研制GPV重组亚单位疫苗奠定了良好基础。