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真姬菇(Hypsizigusmarmoreus)又名蟹味菇、海鲜菇、玉覃、斑玉覃等,属于担子菌门(Basidiomycota)、担子菌纲(Basidiomycetes)、伞菌目(Agaricales)、白蘑科(Tricholomataceae)、玉覃属(Hypsizigus),是一种大型木质腐生真菌。富含多糖、蛋白质、微量元素、维生素等多种生物活性物质,是一种高蛋白、低脂肪、低热量的保健食品,具有抗氧化、提高免疫力、预防衰老、延长寿命的独特功效。本课题以真姬菇SK-01为出发菌株,采用Plackett-Burman(PB)试验和响应面(responsesurfacemethodology,RSM)试验等方法优化了真姬菇胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)和胞内多糖(intracellularpolysaccharide,IPS)的提取条件,并对EPS和IPS进行了体外和体内抗氧化活性的检测,得到结论如下:(1)EPS提取条件通过PB试验及RSM优化,得到EPS最佳提取条件为浓缩倍数2.72倍,pH值8.26,乙醇倍数2.85倍。在此条件下,EPS的提取量理论值达到4.72mg/mL。考虑到实际的操作性,将最佳提取条件调整为:浓缩倍数3倍,pH值8.3,乙醇倍数3倍。在此条件下,EPS的提取量理论值为4.71mg/mL,而实际值为4.66mg/mL,实际值和理论值基本相符。(2)IPS提取条件通过PB试验及RSM优化,得到IPS最佳提取条件为pH7.57,超声波时间618.07s,提取温度84.53C。在此条件下,IPS的提取率理论值达到6.84%。考虑到实际的操作性,将最佳提取条件调整为:pH7.6,超声波时间620s,提取温度85C。在此条件下,IPS的提取率理论值为6.85%,而实际值为6.93%,实际值和理论值基本相符。(3)EPS和IPS的体外抗氧化活性EPS在1g/L时,还原力为1.02,比对照BHT高54.55%,对·OH、O2-·和DPPH自由基的清除率分别为92.31%、71.12%和69.11%,分别比BHT高122.38%、39.97%和54.3%。EPS对·OH、O2-·和DPPH自由基的半数抑制浓度(EC50)分别为0.19g/L、0.53g/L和0.47g/L。IPS在1g/L时,还原力为0.74,比对照BHT高12.12%,对·OH、O2-·和DPPH自由基的清除率分别为52.63%、68.21%和63.43%,分别比BHT高26.79%、34.25%和41.62%。IPS对·OH、O2-·和DPPH自由基的EC50值分别为0.85g/L、0.47g/L和0.62g/L。体外抗氧化结果表明,真姬菇EPS和IPS可显著抑制·OH、O2-·和DPPH自由基,并具有较强的还原力,且在一定程度上,EPS抗氧化性高于IPS。(4)EPS和IPS的体内抗氧化活性通过测定小鼠血液、心、肝、脾、肾组织中抗氧化酶及脂质过氧化物的含量,观察了多糖对机体各组织及全血抗氧化能力的影响。结果表明,EPS和IPS能明显提高各组织及全血中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidsade,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)等抗氧化酶的活性,同时能显著降低体内丙二醛(malondialdehyde,MDA)和脂质过氧化物(lipidperoxidation,LPO)的含量,提高了机体抗活性氧损伤的能力,为防止或减轻人体内脂质过氧化损伤提供了实验依据,是潜在的抗氧化剂。随着EPS和IPS浓度的增加,小鼠各组织及全血中GSH-Px、SOD及CAT活性升高,MDA及LPO含量降低;在一定程度上,当灌胃相同浓度的多糖溶液时,EPS组中GSH-Px、SOD和CAT活性高于IPS组(P<0.05),MDA和LPO含量低于IPS组(P<0.05)。(5)EPS和IPS分离纯化EPS经过DEAE-Cellulose柱层析分离,得到三个组分:EPS-Ⅰ、EPS-Ⅱ、EPS-Ⅲ。经SephadexG-100柱层析分离EPS-Ⅱ,得到单一对称的窄峰。IPS经过DEAE-Cellulose柱层析分离,得到四个组分:IPS-Ⅰ、IPS-Ⅱ、IPS-Ⅲ、IPS-Ⅳ。经SephadexG-100柱层析分离IPS-Ⅰ,得到2个组分:IPS-Ⅰa、IPS-Ⅰb。结果表明,真姬菇SK-01EPS和IPS均具有较强的体外和体内抗氧化能力,为真姬菇多糖的抗氧化机制及构效关系的深入研究奠定了基础。