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目的:研究杜仲叶总提物对体外培养破骨细胞的影响及对大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响,从抑制破骨细胞骨吸收和促进成骨细胞骨形成两个角度探讨杜仲叶总提物防治骨质疏松症的双向作用机理。方法:1.取新生24 h内的SD大鼠股骨、胫骨及肱骨分离已分化成熟的破骨细胞。2.分别以高、中、低浓度的杜仲叶总提物对成熟的破骨细胞进行体外培养,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色计数破骨细胞数目,甲苯胺蓝染色计数象牙片上吸收陷窝的数目。3.取30 d的SD大鼠股骨及胫骨的骨髓,用全骨髓法贴壁分离筛选骨髓基质细胞。4.分别以高、中、低浓度的杜仲叶总提物对骨髓基质细胞进行持续培养,以不含杜仲叶总提物的DMEM培养液为空白对照,采用Gomori钙钴法、茜素红法染色分别观察各组碱性磷酸酶(ALP)、钙结节情况,并取各组不同时间点的培养液测定敏感性成骨指标碱性磷酸酶活性。结果:1.高、中、低浓度杜仲叶总提物均减少TRAP染色阳性细胞数目,也减少骨片吸收陷窝的数目,与空白对照组比较有显著性的差异,且高浓度杜仲叶总提物的影响最显著。2.高、中、低浓度杜仲叶总提物培养的骨髓基质细胞,碱性磷酸酶染色均呈阳性,持续培养能形成钙结节;高、中、低浓度杜仲叶总提物同空白对照组比较有显著性的差异,且高浓度杜仲叶总提物的影响最显著。3.碱性磷酸酶活性测定结果为:随着培养时间的延长,高、中、低浓度杜仲叶总提物与空白对照组的碱性磷酸酶活性均增加,3d时各浓度组与空白对照组间无明显的差异,但是6d时各浓度组的碱性磷酸酶活性均明显高于空白对照组。结论:1.在一定浓度范围内,杜仲叶总提物对破骨细胞性骨吸收有明显地抑制作用。2.采用全骨髓法可获得生长性状稳定,增殖速度快,贴壁细胞成活率高的大鼠骨髓基质细胞。原代培养过程中,接种后48h首次半量换液,可更大限度的获得骨髓基质细胞。3.在一定浓度范围内,杜仲叶总提物能促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化。4.目前还不明确杜仲叶的哪种有效成分具有防治骨质疏松症的作用,有待于进一步研究。