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目的从社区中筛查出具有认知功能衰退的老年人,观察复合营养素与植物提取物组方对其认知功能的改善作用,并对组方中蓝莓提取物的神经保护作用及其机制进行探讨,旨在为老年认知功能衰退的营养干预提供科学依据。方法1.RSPM量表在老年认知功能评价中的应用根据受试者年龄及生活特点,根据知情同意的原则,选择18岁以上青年志愿者201人、60岁以上老年志愿者230为研究对象。应用瑞文标准推理测验(RSPM)量表对其认知功能进行测定。比较老年人与青年人的认知特点,并探讨年龄、受教育程度等因素对老年人认知功能的影响。2.社区老人认知功能衰退的营养干预研究选择60岁及以上的社区老年志愿者180名,根据瑞文标准推理测试评分筛选认知功能减退者60人;再随机分为实验组和对照组,每组30人。实验组服用B族维生素、蓝莓和银杏叶提取物等复合制剂,对照组服用安慰剂,持续6个月。实验前后采用中国科学院心理研究所编制的“基本认知能力测验”软件测试认知功能;同时测定BMI、血糖、血脂、血清T-AOC、抑制羟自由基能力以及血清维生素C、维生素E和同型半胱氨酸(Hcy)含量。3.蓝莓提取物对大鼠海马神经细胞氧化应激损伤的作用及其机制探讨(1)大鼠海马神经细胞氧化应激损伤模型的建立用不同浓度(0～500μM)过氧化氢(H2O2)处理原代培养海马神经细胞24 h,以细胞存活率以及培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性为指标,比较不同浓度H2O2处理对神经细胞的毒性作用;在确定适宜浓度的基础上,比较H2O2处理不同时间对神经细胞的毒性作用,最终建立H2O2诱导海马神经细胞氧化应激损伤的体外实验模型。(2)不同浓度蓝莓提取物对氧化应激损伤海马神经元的作用用6个剂量蓝莓提取物(0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、20μg/ml和40μg/ml)预处理海马神经元24h,再加入50μM H2O2作用24h诱导氧化应激损伤。通过测定细胞存活率和上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性确定减轻海马神经元损伤的蓝莓提取物的适宜浓度。(3)蓝莓提取物不同预处理时间对氧化应激损伤海马神经元的作用用已筛选出的适宜浓度的蓝莓提取物预处理海马神经细胞0h,3h,6h,12h,24h,48h后,用50μM H2O2作用24h诱导氧化应激损伤,通过测定细胞存活率确定蓝莓提取物的最适预处理时间。(4)蓝莓提取物对氧化应激损伤海马神经元的作用机制探讨将原代培养海马神经细胞分为对照组(加入等量培养液)、H2O2组(50μM)以及蓝莓提取物预处理组(1μg/ml),检测细胞内丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用western-blot技术测定认知相关蛋白stathmin 1表达水平的变化。结果1. RSPM量表在老年人群认知功能评价中的应用(1)与青年志愿者比较,老年志愿者瑞文测试各模块A、B、C、D、E得分及总分均显著降低(P<0.05)。(2)控制性别、受教育程度、居住环境的影响,对老年志愿者年龄与RSPM得分进行偏相关分析,结果显示,年龄与RSPM得分呈负相关,随着年龄的增高,其RSPM得分随之下降。(3)控制年龄、性别的影响,对受教育程度与RSPM得分进行偏相关分析,结果显示,受教育程度与RSPM得分呈正相关,随着受教育程度的提高,其RSPM得分随之升高。2.社区老人认知功能衰退的营养干预研究(1)实验前,两组基本认知能力、BMI、血清白蛋白、血清抑制羟自由基能力、血清总抗氧化力及维生素C、维生素E水平均无显著性差异(P >0.05)。(2)干预6个月后,与对照组和实验前比较,实验组老年人血清白蛋白水平、血清抑制羟自由基能力、血清维生素C、维生素E水平均显著升高(P <0.05),血清总抗氧化力与实验前比较明显提高(P <0.05)。(3)干预6个月后,实验组老年人汉字旋转、数字记忆广度、无意义图形再认分测验得分与实验前比较明显提高,且显著高于对照组(P <0.05)。3.蓝莓提取物对大鼠海马神经细胞氧化应激损伤的作用及其机制探讨(1)用浓度为0~500μM的H2O2处理海马神经细胞24 h,结果显示,50μM的H2O2作用24h后,海马神经细胞细胞存活率显著下降,培养上清中LDH活性显著升高(P <0.05)。(2)与H2O2组比较,蓝莓提取物组(0.1μg/ml,1μg/ml,10μg/ml)LDH活性显著降低(P <0.05),细胞存活率由H2O2组的57.44%分别上升至78.42%、87.71%、72.40%;提示1μg/ml蓝莓提取物组对H2O2诱导的海马神经细胞氧化应激损伤的保护作用最好。(3)与0h比较,1μg/ml蓝莓提取物预处理12h和24h,再用H2O2诱导氧化应激损伤,细胞存活率分别提高19.23%和33.16%(P<0.05);与对照组比较,1μg/ml蓝莓提取物组预处理24h后细胞存活率无显著性差异(P>0.05)。故选用24h作为1μg/ml蓝莓提取物预处理海马神经细胞的最适作用时间。(4)与对照组比较,H2O2组海马神经细胞的凋亡率显著升高(P <0.05),为对照组的8.55倍,而神经细胞内stathmin 1蛋白表达下调;与H2O2组比较,1μg/ml蓝莓提取物预处理24h再诱导氧化应激,细胞内MDA含量及细胞凋亡率均显著降低,SOD活性显著升高(P <0.05),stathmin 1蛋白表达显著上调(P <0.05)。结论1. RSPM量表可用于老年认知功能衰退筛查。2.营养干预能改善认知衰退老人学习记忆和理解能力等认知能力,并提高体内抗氧化能力。3.成功建立了H2O2致大鼠原代海马神经细胞氧化应激损伤模型。4.适宜浓度的蓝莓提取物对氧化应激损伤的海马神经元有一定的保护作用。5.蓝莓提取物对氧化应激损伤的海马神经元保护作用的机制可能与其增强神经细胞的抗氧化功能、抑制海马神经元凋亡以及上调stathmin 1蛋白的表达有关。