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目的：构建真核表达载体pcDNA3.1-转化生长因子β1(transforminggrowth factor- betal，TGFβ1)质粒，观察其转染大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)后的表达及表达产物对细胞增殖的影响。
方法：
1.大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及其生物学特性的观察
2.pcDNA3.1-TGFβ1真核表达载体的构建及鉴定
3.pcDNA3.1-TGFβ1转染BMSCs
4.RT-PCR检测在BMSCs中TGF-β1 mRNA的表达
5.Western blot分析转染后的TGFβ1蛋白表达
6.MTT法和荧光染色检测pcDNA3.1-TGFβ1对BMSCs细胞增殖的影响
结果：
1.分离获得的BMSCs细胞生长稳定、增殖活跃
(1)倒置光显微镜下观察细胞形态变化：在倒置光显微镜下可见BMSCs在接种后24h可见有细胞贴壁并伸出伪足，4d可见有细胞集落形成，14d细胞可达到90％融合。经传代后细胞趋于一致，为纤维样细胞，呈漩涡或火焰状生长。
(2)透射电镜观察细胞亚微结构：在透射电镜下可见细胞体积较小核大，核仁明显。染色质分布稀疏，电子密度低。细胞表面有微绒毛，胞质稀松，内有丰富核糖体，而内质网、线粒体、高尔基复合体等细胞器少见，提示细胞处于原始未分化状态。
(3)生长曲线的测定：绘制的生长曲线呈“S”形，第2天细胞开始增殖，第3天细胞进入指数增生期，第9天细胞数量达峰值进入平台期，此后细胞数量下降。
(4)流式细胞术：细胞经DNA染色后采用流式细胞仪测定其DNA含量证明S期细胞比率为21.1％。
(5)BMSCs细胞鉴定：免疫细胞化学染色和流式细胞术证明C-kit阳性细胞比率为53.3％，CD45表达阳性率为1.68％。
2.成功构建pcDNA3.1-TGFβ1质粒
质粒能够被HindIII和EcoRI酶切出一条约1200bp左右的DNA小带，证实pcDNA3.1-TGFβ1(+)质粒构建成功。
3.RT-PCR检测转染后TGF-β1 mRNA的表达
转染细胞后48h，pcDNA3.1-TGFβ1转染组表达强于其他各组，它的Icreased intensity of opical density(IOD)值为31.21±1.80是空质粒组(14.61±0.47)的2.1倍，是12h(22.05±0.65)的1.37倍。
4.Western blot分析转染后TGFβ1蛋白表达
Western blot分析显示转染48h后，pcDNA3.1-TGFβ1转染组蛋白表达平均IOD值（30.94±2.95）是转染空载体组（13.01±2.32）的2.38倍。
5.MTT比色法测定细胞存活率
pcDNA3.1-TGFβ1转染后细胞存活率较其他各组为高，至48hA值为0.637±0.009与空质粒组0.303±0.011比较p＜0.05。
6.荧光染色检测死活细胞比率
pcDNA3.1-TGFβ1组转染后48h活细胞比率为55.5％明显较pcDNA3.1组46.5％为高(P＜0.05)。
结论：成功建立了一种分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的方法，获得的细胞生长稳定，增殖活跃；pcDNA3.1-TGFβ1质粒构建成功；pcDNA3.1-TGFβ1转染BMSCs上调TGFβ1mRNA和蛋白的表达；pcDNA3.1-TGFβ1转染促进BMSCs的增殖。