【摘 要】
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核酸适体为一段寡聚核苷酸(ssDNA或RNA)序列,是经指数级富集的配体系统进化技术从随机序列库中筛选出的能与靶分子特异性结合的片段。它具有靶分子种类广泛、高特异性、高亲
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核酸适体为一段寡聚核苷酸(ssDNA或RNA)序列,是经指数级富集的配体系统进化技术从随机序列库中筛选出的能与靶分子特异性结合的片段。它具有靶分子种类广泛、高特异性、高亲和性、可体外人工合成、易于修饰、便于长期保存和室温运输等特点,因此被称为“化学抗体”。核酸适体已被广泛应用于化学检测、蛋白质功能研究以及临床诊断和治疗。本论文利用毛细管电泳对核酸适体与其靶分子体系进行了研究,主要包括以下三个部分: 1.设计一种基于核酸适体结构变化的金属离子辅助-毛细管区带电泳法(MCM-CZE)检测小分子。荧光修饰的核酸适体与互补链温育并杂交,然后使用MCM-CZE-LIF对游离态的核酸适体和互补链.核酸适体双链进行分离。当加入靶分子时,游离态的核酸适体和互补链.核酸适体双链的荧光信号将发生变化。因为MCM-CZE实现了两种结构的分离,可精确地监控核酸适体在靶分子诱导下的结构变化过程。通过对核酸适体不同结构进行分离,有效降低了背景。由于不需要分离检测核酸适体-靶分子复合物,方法应用范围更加广泛。 2.建立了基于非标记核酸适体的毛细管凝胶电泳检测凝血酶的方法。核酸适体与靶分子的结合特性,可诱导核酸适体.互补链双链的解离。毛细管凝胶电泳(CGE)可对核酸适体、互补链及双链进行有效的分离,并在分离过程中使用染料对核酸进行动态荧光染色。因此,通过双链荧光强度的变化,可使用非标记的方法对凝血酶进行高灵敏度的检测(LOD0.13 nM)。 3.建立了基于非标记核酸适体的毛细管凝胶电泳进行多目标物同时检测的方法。不同长度的核酸链(包括多种核酸适体单链、对应的互补链单链及双链),能够在毛细管凝胶电泳中被高效分离。将不同的核酸适体与其互补链所形成的双链DNA混合,通过对应双链DNA在靶分子作用下所导致的荧光信号变化,可在同一次电泳分离中进行多目标的检测,初步建立利用非标记核酸适体同时检测多个靶分子的方法。
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