广西2种甘薯病毒(SPFMV与SPCSV)的CP基因序列分析及SPCSV抗血清制备

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甘薯病毒病是广西甘薯的主要病害之一。从广西南宁、崇左、北海、玉林的甘薯种植区采集疑似甘薯病毒病样品,通过RT-PCR法进行甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus, SPFMV)与甘薯褪绿矮化病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus, SPCSV)的检测,发现SPFMV、SPCSV在广西普遍存在,当甘薯单独感染SPFMV与SPCSV时,表现的病毒病症状轻微,但甘薯同时感染SPFMV和SPCSV时,表现出植株矮化、叶片皱缩等严重症状。设计扩增SPFMV与SPCSV的CP基因的引物,通过克隆并测序分别得到18个SPFMV广西分离物的CP基因序列和14个SPCSV广西分离物的CP基因序列。SPFMV广西分离物CP基因的核苷酸序列945bp,编码315个氨基酸;SPCSV广西分离物CP基因的核苷酸序列774bp,编码257个氨基酸。其CP基因的序列分析结果表明:SPFMV广西分离物存在O株系、RC株系、EA株系,不存在C株系,其中O株系是SPFMV广西分离物的优势株系;SPCSV广西分离物只有WA株系,无EA株系。将RT-PCR扩增得到SPCSV的CP基因克隆到pET30a(+)载体上,转化于大肠杆菌BL21(DE3)pLysS, IPTG诱导表达得到与预期大小一致的SPCSV CP的目的蛋白。经纯化回收后免疫兔子,获得了SPCSV CP的抗血清。通过ELISA和Western Blot检测,抗血清的效价达到1:64000,特异性好。SPCSV CP抗血清为生产上监测SPCSV的侵染提供技术条件。
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