目的:肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）负调控哺乳动物骨骼肌生长。MSTN基因突变导致MSTN功能丧失会使家畜骨骼肌细胞数量增加以及骨骼肌纤维直径增大,使家畜的体重增加,体脂率降低。碱基编辑器（base editors,BEs）无需DNA双链断裂（double stand broken,DSB）即可实现特定的DNA点突变,具有高编辑效率、高准确性、不产生基因组DSB以及不需要供体DNA模板诱导定向突变的特点。CBE（cytidine base editor,CBE）可以诱导C到T的碱基转换,因此,诱导4个密码子（CAA,CAG,CGA或TGG）转换为终止密码子可以精确敲除基因。哈萨克羊是新疆优秀的地方品种,运用基因编辑、显微注射和胚胎移植等技术可以加快哈萨克羊新品种的培育。本研究利用CBE（Sa KKH-BE3或Anc BE4max）在哈萨克羊MSTN基因编码区提前引入终止密码子,阻止翻译形成完整蛋白,促进骨骼肌发育,以期提高哈萨克羊产肉性能、降低体脂率。方法:（1）在哈萨克羊MSTN基因外显子区域设计3个不同的sg RNA,构建sg RNA表达载体以及带有荧光标记的Sa KKH-BE3,将Sa KKH-BE3或Anc BE4max表达载体转入哈萨克羊成纤维细胞,以期在MSTN基因编码区提前引入终止密码子,利用CruiserTM酶酶切检测和Sanger测序技术进行验证,筛选出高效的CBE编辑器和sg RNA。（2）运用显微注射技术将试验一筛选到的高效CBE编辑系统Anc BE4max m RNA和sg RNA注射到哈萨克羊孤雌激活胚胎中进行验证,注射胚胎分为激活前注射和激活后注射2组,胚胎注射后培养7天收集检测并统计胚胎发育率,通过T7EI核酸酶酶切检测和Sanger测序进行检测,比较不同注射时间对胚胎发育率的影响以及对编辑效率的影响。（3）运用显微注射技术将Anc BE4max m RNA和sg RNA注射到1细胞期受精胚中,利用相同的sg RNA,以CRISPR/Cas9作为对照,在受精胚胎中进行验证,并对预测的脱靶位点进行检测。并运用Anc BE4max系统制备定点编辑MSTN基因哈萨克羊。结果:（1）本试验成功构建带有荧光标记的p JL-Sa KKH-BE3-CMV-GFP质粒。Anc BE4max系统在STOPsg-2和STOPsg-3靶位点实现了有效编辑,STOPsg-2和STOPsg-3靶位点的编辑效率分别为26.7%和6.7%。（2）结果显示,在胚胎水平STOPsg-2靶位点无编辑效果。对于STOPsg-3位点,激活前注射和激活后注射的卵裂率分别为86.6%和85.5%,囊胚率分别为21.1%和20.1%,表明两个时间段进行显微注射胚胎发育无差异。编辑效率分别为70%和60%,表明卵母细胞孤雌激活前后均可进行显微注射,在胚胎水平Anc BE4max具有良好的编辑效果。（3）Anc BE4max和CRISPR/Cas9靶向STOP-sg3均可以发生有效编辑,编辑效率分别为90%和57.1%。对预测的3个脱靶位点进行检测,未检测到脱靶,表明Anc BE4max和CRISPR/Cas9在胚胎水平均具有较高的打靶精度。获得5只健康基因编辑羔羊。结论:本研究运用Anc BE4max碱基编辑器在细胞水平、孤雌激活胚胎中和体外受精胚胎中成功编辑哈萨克羊MSTN基因,获得5只健康基因编辑哈萨克羔羊,建立了一套由Anc BE4max系统介导的制备定点编辑MSTN基因哈萨克羊的技术方法,对其它大动物模型的开发具有借鉴意义。