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神经系统是绦虫等扁形动物体内产生和运输神经激素、递质和调节肽等信息调节物质的唯一结构,在虫体的生命调控中起着至关重要的作用。有关绦虫神经系统详细结构、肽能神经系统的定位和神经肌肉系统关系等的研究极少或为空白。本研究应用组织学、免疫细胞化学、扫描和透射电镜、共焦扫描激光显微镜及分子生物学技术,首次对有钩绦虫、泡状绦虫、扩展莫尼茨绦虫和舌形绦虫幼虫的神经系统进行详细的功能形态学研究。主要涉及肽能神经系统的定位、分布模式和结构以及与肌肉系统的关系。实验结果如下:一、神经系统结构特征 绦虫神经系统由脑神经节、主神经索和横神经等中枢神经系统及分布全身的外周神经系统组成。神经细胞胞体呈多极或双极形,胞径3~4μm。超微结构水平表现了很高的分泌细胞特征,细胞含有大量清亮小泡(30~50nm)和少量的致密核心囊泡(50~100nm)。中枢和外周神经系统存在大量的神经内分泌细胞,尤其以外周神经系统分布广泛。它们的形态和结构与神经细胞相似,最大的区别是胞体内含有大的致密核心囊泡。根据其大小、结构和位置的不同区分为两个类型。Ⅰ型细胞胞体直径为3~4μm,主要位于脑神经节和主神经索周缘,胞体含有大的致密核心囊泡(100~250nm)和少量电子致密偏心囊泡(70~160nm)。Ⅱ型细胞主要位于外周神经系统,分布于吸附器官、生殖管道和体肌,胞体直径6~12μm,胞体内含有大致密囊泡(100~220nm)。神经纤维末梢之间可见轴树、轴轴、轴体和树树突触,以轴轴突触和轴树突触较常见,这些突触为对称或非对称性突触。神经与肌肉的联系十分广泛,以神经内分泌轴突在肌肉的分布为主。光镜下,可观察到PAF、PAT和AF阳性神经内分泌细胞和纤维分布于体肌、吸盘肌肉、顶突肌肉和生殖器官管壁肌肉,并形成明显的神经丛。在神经与肌肉的广泛联系中,未观察到类似脊椎动物神经肌肉接头一运动终板样的结构。电镜下神经内分泌轴突与肌纤维的联系方式主要有三种方式:(l)神经内分泌轴突末梢与肌纤维伸出的肌浆臂靠近; (2)轴突终末内的致密核心囊泡直接与轴突膜接触,释放分泌颗粒入细胞间隙;(3)含致密囊泡的神经内分泌轴突与肌纤维或肌细胞膜靠近,膜间隙不甚明显,膜增厚。此外,在外排泄系统也观察到大量的神经纤维分布,并发现中枢和外周神经系统的少数轴突外周存在髓鞘样的结构。上述结果表明神经系统存在大量的神经内分泌细胞,具有明显的内分泌特征,胞体和突起含有大致密核心囊泡,表明以肽能成份为主,尤其在外周神经系统的分布广泛。在神经与肌肉的联系中,未观察到神经肌肉接头一一运动终板结构,以含大致密核心囊泡的轴突在肌肉的分布占主导地位,提示绦虫神经对肌肉的支配主要以神经内分泌轴突为主,多以旁分泌形式作用于靶细胞。首次发现在有钩绦虫、泡状绦虫等的神经系统存在髓鞘样的结构,本实验三观察到的 S-100蛋白免疫反应阳性物在绦虫神经系统的分布也证实绦虫可能含有神经胶质细胞样的结构。二、催乳素样物质在绦虫神经系统存在的免疫细胞化学及分子特性 分析 应用免疫组织化学方法、CSLM、Western blot分析和 PCR技术检测催乳素(PRL)样物质在绦虫成虫和幼虫神经系统的定位。结果:()大量的 Pffe阳性反应细胞和纤维分布干成虫和幼虫的脑神经节、主神经索和横神经,但幼虫脑神经节的阳性细胞数量较少;(2)阳性反应物在吸盘的周缘和顶突小钩肌肉内着色较浓;(3)丰富的PRL阳性细胞和长的突起位于输卵管、输卵黄管、卵模腔/梅氏腺、贮精囊、输精管和于宫等主司卵子、精子输送和受精的生殖管道,幼虫的阳性细胞和纤维散在分布于生殖原基附近;(4)在髓质、肌肉、皮层下区和纵排泄管壁有阳性纤维分布。髓质肌层中,幼虫的阳性细胞和纤维十分发达,主要位于纵肌、横肌和纵横肌肌间; 5)Western Blot分析后观察到泡状绦虫组织粗提物中存在分子量约为23KDa左右的催乳素样免疫反应阳性带,用根据羊催乳素基因第五外显于编码区设计的引物进行PCR扩增后, 48I 从泡状绦虫DNA的扩增产物中获得与对照组羊的DNA扩增带大小相同的特g 异片段。本结果首次证实PRL样兔疫反应物大量存在于绦虫神经系统、头节 吸盘和顶突等附着器官和生殖器官主司卵、精子运输、受精和装配成虫卵的生 殖管道。在幼虫体内PRL兔疫反应阳性物以外周神经系统的分布占明显优势, 而成虫的外周和中枢神经系统的分布均非常丰富,尤其是在附着器官和生殖器 官管道十分发达。结果强烈提示PRL样物质可能参与了头节附着器官和生殖 器官肌肉的调节功能。Western Blot分析进一步证实泡状绦虫等存在脊椎动物 PRL样分子,其分子量大小与脊椎动物催乳素的相似,P