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目的:通过差异蛋白组学的方法探询卵巢上皮性癌患者体内特异性表达的蛋白,寻找卵巢上皮性癌的血清标志物,以提高其早期诊断率。
方法:收集年龄匹配的20 例卵巢上皮性癌和20 例卵巢良性肿瘤病人外周血血清,等容积混合去除高丰度蛋白后,利用液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)鉴定两组血清中的差异蛋白,实验重复三次,DeCyder软件分析后得出有临床应用意义的显著表达差异的蛋白。采用免疫比浊法验证获选的血清标志物。对获选的血清标志物进行卵巢上皮性癌诊断试验评价。
结果:⑴LC-MS/MS 共筛选出94 个具有显著差异的蛋白,与良性卵巢肿瘤相比,在卵巢上皮性癌中,N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸酰胺酶(Isoform1 of N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase , PGRPL )、铜蓝蛋白(Ceruloplasmin)、补体9(Complement component,C9)等蛋白表达明显上调, Isoform 1 of Mirror-image polydactyly gene 1 protein (MIPOL1)、载脂蛋白A-IV (APOA-IV)等蛋白表达明显下调。⑵免疫比浊法验证结果显示,铜蓝蛋白浓度在卵巢上皮性癌血清中明显升高,且铜蓝蛋白浓度在卵巢上皮性癌和和卵巢良性肿瘤、卵巢上皮性癌和健康对照间的差异有统计学意义。⑶单独诊断,铜蓝蛋白的特异度较高;CP+CA125 联合诊断,灵敏度及准确度较单独诊断明显升高,CP+CA125 联合诊断约登指数最高;铜蓝蛋白的检测有助于排除CA125 假阳性的情况。
结论:LC-MS/MS 技术在卵巢上皮性癌筛选肿瘤标志物方面具有一定的优势,具有较高的灵敏度、动态范围和可重现性。经鉴定的PGRPL、铜蓝蛋白和C9 3 种蛋白质可能在卵巢上皮性癌发病中发挥作用。铜蓝蛋白是卵巢上皮性癌血清中差异表达的蛋白质,可作为卵巢上皮性癌的标志物,CP+CA125 联合检测有助于提高卵巢上皮性癌的灵敏度及准确度。