论文部分内容阅读
目的：了解天津市麻疹病毒(measles virus,MV)流行株的基因型并在本实验室建立分子病毒学的研究方法。方法：将2002年天津市的麻疹散发病人尿液标本中分离到的麻疹病毒12株用EB病毒转化的绒猴淋巴细胞(B95a细胞)复苏后，提取其总RNA，采用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)方法扩增出核蛋白(N)基因碳末端590个核苷酸片段，用BcnⅠ内限酶进行限制性片段长度多态性分析(RFLP)后，选取了3株与PMD-18T Vector构建重组质粒。对重组质粒进行核酸序列测定，并对N基因碳末端456个核苷酸进行序列系统树分析。结果：RT—PCR后12份均检测出590bp的特异性N基因目的条带，经RFLP后，显示两种类型的谱带。通过对3株病毒重组质粒的序列测定和分析证明，3株均为麻疹病毒H1基因型，其中1株为H1b亚型，另外两株为H1a亚型。H1a的2株的456个核苷酸与H1b株的差异为3.07～4.17％。这3株的456个核苷酸与A基因型代表株序列的基因差异为6.36～7.23％，与H1基因型代表株的基因差异为1.53～2.41％。3株与A基因型代表株序列相比氨基酸有义突变共达16处。结论：2002年天津市麻疹散发病例的核酸序列为H基因型，本研究中所建立的实验方法可用于今后继续监测我市麻疹流行株的基因变异，对我国加速麻疹控制及麻疹消除、消灭是十分必要的。