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研究背景:目前慢性粒细胞白血病（CML,chronic myeloid leukemia）临床治疗主要的难题就是耐药,尤其是不依赖于BCR-ABL1的耐药。前期研究发现SOS1（son of sevenless homolog 1）是mi R-181a的靶基因,并且经细胞系及临床病例筛查得出SOS1在CML中表达量较正常细胞/样本高,初步鉴定SOS1在CML中具有癌基因性质,但SOS1在CML中具体的作用机制及其与伊马替尼（imatinib）敏感性/耐药性的关系尚不清楚。研究目的:本课题致力于探索癌基因SOS1在CML中与imatinib药物敏感性与不依赖于BCR-ABL1耐药性的关系及其分子机制,为克服不依赖于BCR-ABL1的耐药提供新的潜在治疗靶点。研究方法:1.脂质体Lipofectamine TM 2000转染SOS1-si RNA#1/#2/#3到K562/KCL22/BV173细胞;Western Blot和q PCR验证筛选有效的SOS1-si RNA序列;2.利用SOS1质粒构建、嘌呤霉素筛选过表达SOS1蛋白的K562/KCL22细胞;Western Blot验证细胞内SOS1表达水平;3.CCK-8试剂检测SOS1对K562/KCL22细胞活力的影响;4.细胞周期检测试剂盒检测靶向抑制SOS1对K562/KCL22细胞周期的影响;5.软琼脂克隆形成实验（soft agar assay）检测SOS1对K562/KCL22细胞克隆形成能力的影响;6.Balb/c裸鼠皮下成瘤实验检测体内SOS1-si RNA对K562细胞增殖的影响;7.CCK-8试剂检测SOS1对K562/KCL22/KU812细胞对imatinib药物敏感性的影响;Soft agar assay检测SOS1对K562/KCL22细胞对imatinib药物敏感性的影响;8.293T-Flag-SOS1/293T-Flag-empty免疫沉淀（IP）产物,质谱检测并分析鉴定蛋白组分;9.RNA-seq检测与SOS1相互作用基因;q PCR/Western Blot验证细胞内SOS1与SLC22A4表达变化;10.HPLC检测SOS1对K562/KCL22细胞imatinib吸收影响;11.不断增加KCL22细胞imatinib培养浓度,构建不依赖于BCR-ABL1耐药细胞株KCL22-IMR;12.SOS1/Ras抑制剂BAY-293处理KCL22-IMR,CCK-8检测细胞活力,soft agar assay检测细胞克隆形成能力变化;13.Western Blot检测BAY-293处理后KCL22-IMR细胞中SLC22A4蛋白相对表达量变化;14.HPLC检测SOS1对KCL22-IMR细胞imatinib吸收影响;研究结果:1.SOS1-si RNA#3靶向抑制SOS1,降低了K562/KCL22细胞活性和细胞克隆形成能力,增强了细胞对imatinib的药物敏感性;2.SOS1过表达的K562/KCL22细胞株,WB验证SOS1表达量明显增多;3.过表达SOS1,增强了K562/KCL22细胞克隆形成能力,降低了细胞对imatinib的药物敏感性;4.靶向抑制SOS1,K562/KCL22细胞周期抑制在G0/G1期;5.Balb/c裸鼠皮下成瘤实验,K562-SOS1-si RNA#3组增殖能力较NC组明显降低;6.IP产物的质谱结果显示,与SOS1相互作用的蛋白一共有103个,其中包括SLC22A4,KEGG整合到多条信号通路包括PI3K-AKT信号通路;靶向抑制SOS1抑制了PI3K-AKT信号通路,促使P27增加,细胞周期抑制;7.RNA-seq检测表明,靶向抑制SOS1促进了K562/KCL22细胞中SLC22A4的表达;8.qPCR/Western Blot验证了K562/KCL22细胞中靶向抑制SOS1促进SLC22A4表达;9.HPLC检测到靶向抑制SOS1促进了K562/KCL22细胞对imatinib的吸收;10.构建的imatinib耐药株（KCL22-IMR）,能够耐受高达10μM的imatinib;11.SOS1/Ras抑制剂BAY-293,抑制了耐药株细胞活力及克隆形成能力;12.BAY-293促进了KCL22-IMR细胞中SLC22A4的表达;促进了KCL22-IMR细胞内imatinib含量;研究结论:1.SOS1在CML中具有癌基因性质,靶向抑制SOS1有效抑制了CML的恶性进展;2.SOS1通过负调控SLC22A4表达,影响CML对imatinib的药物敏感性和耐药性;3.BAY-293,可作为潜在治疗不依赖于BCR-ABL1耐药的抑制剂;