论文部分内容阅读
随着分子生物学和分子遗传学研究的发展,特别是重组DNA技术的广泛应用,蓝藻分子遗传学取得了许多成就。其中集胞藻(Synechocystis sp.)PCC6803是一种具有天然DNA转化系统的单细胞蓝藻,它既能利用光能进行自养生长,也能利用葡萄糖进行异养生长,是光合作用分子生物学研究的重要模式之一。
在本研究中,PCR扩增了蓝细菌集胞藻6803(Synechocystis sp. PCC6803)中功能未知的基因slr0280,进一步以pBluescript SK(+)为载体将其克隆到大肠杆菌中,构建了pBlue-0280质粒。再通过DNA体外重组,以卡那霉素抗性基因完全取代slr0280基因片段,构建了携带选择性标记的卡那霉素抗性的pBlue-0280-kana质粒。该质粒转化野生型集胞藻6803细胞,获得了能在含卡那霉素的培养基上正常生长的slr0280基因缺失突变株。对该突变株基因组DNA进行PCR扩增,验证其基因结构的正确性。
从生理曲线,藻胆蛋白、叶绿素a的含量和光合放氧速率及光照强度,外源葡萄糖,盐浓度梯度对藻的生长的影响,常温光谱及低温荧光光谱等几个方面对突变株进行了探究。突变株细胞生长速度较野生型细胞慢,胞内的叶绿素及藻胆蛋白的含量比野生型偏低,表明该突变株的光合效率有所下降。在有外源葡萄糖存在的条件下,突变株生长状况比野生型的好,说明此突变株比较适合混养生长。低温荧光光谱显示,slr0280基因的缺失,并未对光合作用过程能量的传递造成很大影响,其功能有待于进一步探究。